固相化 pH 梯度双向凝胶电泳实验一方案13 用 SYPRO Ruby 进行荧光染色
| 实验材料 | 含蛋白质样品的凝胶 试剂、试剂盒 | 固定液SYPRORuby染料 仪器、耗材 | 聚丙烯塑料平皿往复式或定轨式摇床UV或蓝光透射仪 实验步骤 | 1.将胶放入聚丙烯塑料平皿中，其中应有足够的固定溶液，使凝胶在平皿中能自由漂浮。在摇床上摇动30min。 如果是多块凝胶同时被固定，应在不同的平皿中染色。 2.从平皿中倒出固定液，在平皿中用方形塑料纸或聚碳酸酯薄片支持凝胶。不要用带手套的手接触凝胶。将凝胶放在SYPRORuby溶液中染色90min，放置^往复式或定轨式摇床，黑暗中温育过夜。 标准大小的凝胶所需染色液的最小体积如下： 如染色液太少，会降低敏感度。伴随染色时间的延长，敏感度会升高。染色少于3h可获得最大敏感度。如果继续染色，将会大大降低敏感度。 3.（可选）弃去SYPRORuby染色液。如有残留染料会导致较高的荧光背景。 为了将残留染料除去，将凝胶放在一定体积的固定液中（体积相当于步骤②中染料体积），在摇床上摇动30min。 4.用300nm蓝光透射仪或激光扫描仪呈现蛋白。SYPRORuby的最大激发波长是300nm和420nm，最大发射波长是618nm。 一些预制凝胶的聚酯化背面对荧光是高度敏感的，此时应用UV透射仪。将聚丙烯酰胺凝胶颠倒，用一个发射过滤器来屏蔽蓝色荧光。蓝光透射仪或激光扫描仪的使用将会减少塑料背面的荧光数量。这种染料和目胃系统相适合。图像系统在450nm、473nm、488nm、532nm都有激光发射。目前，激光扫描仪的最大供应商也能提供选择过滤这种染料的装置。 |
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发布于 ： 2021-08-29
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