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免疫共沉淀(Co-Immunoprecipitation)是以抗体和抗原之间的专一性作用为基础的用于研究蛋白质相互作用的经典方法。是确定两种蛋白质在完整细胞内生理性相互作用的有效方法。注意:在准备做磷酸(酯)酶实验的时候,不加磷酸酯酶抑制剂。工作液配制配制 100 ml 的 modified RIPA buffe:1. 称取 790 mg 的 Tris-Base,加到 75 ml 去离子水中,加入 900 mg 的 NaCl,搅拌,直到全部溶解,用 HC 查看更多>
   随着生物技术的不断发展,基因工程表达体系的生产能力大幅度增加,不少基因工程药物的生产规模已达数千甚至万升级发酵罐。细胞表达量可达数g/L甚至10g/L。种类丰富的高表达量上游产品对下游纯化提出了挑战,尤其是目前的纯化工艺中多采用琼脂糖基质的微球作为层析填料,该基质微球虽生物相容性好,但骨架刚性低,在较高的压力下容易出现变形或者孔道的改变,影响纯化效率。很多企业只能以牺牲高流速的形式来保证纯化效率,无形中拉长了蛋白的纯化时间,使... 查看更多>
琼脂糖(超纯,通用电泳级)是由上海西宝生物科技有限公司代理或销售的seebio品牌的试剂,产品来源于进口。上海西宝生物科技有限公司是中国最权威的琼脂糖(超纯,通用电泳级)试剂销售服务商之一,在上海等地方销售琼脂糖(超纯,通用电泳级)试剂已经多年。生物在线为您提供众多企业琼脂糖(超纯,通用电泳级)仪器产品及图片,以便挑选到性价比高,合适的琼脂糖(超纯,通用电泳级)产品 查看更多>
产品名称: Agarose, Low melting 低熔点琼脂糖 包装: 5g 产品类别: F-生化试剂类 CAS#: [9012-36-6] 级别: 生物技术 储存条件: 18~25℃ 产品属性: Gel strength (1.5%) >480g/cm2 mp: 62~68℃ 查看更多>
低熔点琼脂糖是经过化学修饰的琼脂糖,具有更高的筛过特性,更透明。是理想的DNA和RNA电泳产品,也适合组织培养细胞的克隆和病毒空斑分析。多糖链上引入羟乙基、甲氧基等基团后的琼脂糖。由于其能在30℃左右成胶,约65℃熔化,熔化温度低于大多数双链DNA熔点。利用低熔点琼脂糖的这种性质可以... 查看更多>
琼脂糖凝胶电泳也常用于分离、鉴定核酸,如DNA鉴定,DNA限制性内切核酸酶图谱制作等。由于这种方法操作方便,设备简单,需样品量少,分辨能力高,已成为基因工程研究中常用实验方法之一。 天然琼脂(agar)是一种多聚糖,主要由琼脂糖(agarose,约占80%)及琼脂胶(agaropectin)组成。琼脂糖是由半乳糖及其衍生物构成的中性物质,不带电荷,而琼脂胶是一种含硫酸根和羧基的强酸性多糖,由于这些基团带有电荷,在电场作用下能产生较强的... 查看更多>
多糖链上引入羟乙基后的琼脂糖。由于其能在30℃左右成胶,约65℃熔化,熔化温度低于大多数双链DNA熔点。利用低熔点琼脂糖的这种性质可以从凝胶中回收天然形式的DNA。低熔点琼脂糖是一种生化试剂,,所制凝胶具有更高的筛过特性,更透明。是理想的DNA和RNA电泳产品,也适合组织培养细胞的克隆和病毒空斑分析,主要有以下四种。1.SeaPlaque 琼脂糖---低熔点温度琼脂糖的世界标准属分子生物学级别,是一种低熔点琼脂糖,所制凝胶具有更高的筛... 查看更多>
铜-琼脂糖凝胶HP/Cu-SepharoseHPCu-SepharoseHP270316浙江爱因斯生物科技有限公司铜-琼脂糖凝胶 HP/Cu-Sepharose HP 查看更多>
实验原理限制性内切酶切割后的DNA片断经过电泳后,按分子量大小被分开,排列在琼脂糖凝胶中,可以将特定的某条DNA带所在的凝胶切下来,加热或用特殊的试剂熔解凝胶,使DNA溶回到溶液中,再经过乙醇沉淀或过柱即可获得目的 DNA酶切片段。实验试剂1. 电泳缓冲液2. 荧光染料3. 电泳级琼脂糖粉4. 10′加样缓冲液5. DNA分子量标准(DL2000)6. DNA凝胶回收试剂盒实验设备1. 旋涡混合器2. 微量移液取样器3. 移液器吸头4. 查看更多>
苏州盖德精细材料有限公司在发布的琼脂糖凝胶DNA回收试剂盒供应信息,浏览与琼脂糖凝胶DNA回收试剂盒相关的产品或在搜索更多与琼脂糖凝胶DNA回收试剂盒相关的内容。 查看更多>
E-Gel预制琼脂糖凝胶电泳系统是由LifeTechnologies代理或销售的Invitrogen品牌的仪器,产品来源于美国。LifeTechnologies是中国最权威的E-Gel预制琼脂糖凝胶电泳系统销售服务商之一,在上海等地方销售E-Gel预制琼脂糖凝胶电泳系统已经多年。同时,生物在线为您提供众多企业E-Gel预制琼脂糖凝胶电泳系统仪器产品及图片,以便挑选到性价比高,合适的E-Gel预制琼脂糖凝胶电泳系统产品 查看更多>
l、去除DNA样品中的杂质 琼脂糖是从琼脂中提取出来的,其中吉有较多的酸根和羟基多糖。目前大多数级别的璩脂糖中混有硫酸酯多糖,这种物质能抑制基因克隆中使用的多种工具酶的活性,如DNA限制性内切酶、连接酶、激酶及聚合酶。在回收DNA时应尽量减少这些酶抑制剂的污染。不管用哪种方法,回收DNA片段的溶液,要用2.5mol/L醋酸铵和乙醇沉淀再用7。q.乙醇漂洗数次,这样处理,可以很有被地去除一些有害的有机分子和无机盐沉淀。已筏列 查看更多>
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影响核酸电泳迁移率的几个因素

1、核酸分子大小

在一定浓度的琼脂糖凝胶中,DNA片段迁移距离和其含有的碱基对数量成反比,因此可以通过与标准条带迁移距离进行比较,由此得出目的条带的大小,但这仅对双链线性的DNA比较准确(DNAMarker一般为双链线状DNA),且对大于20kb的DNA不适用(普通琼脂糖凝胶很难将其分开)。

2、核酸分子构象

DNA分子在电场中的迁移速度不仅和分子量有关,还和它本身的构象有关。相同分子量的线状、开环和超螺旋DNA在琼脂糖凝胶中的移动速度不一样,移动速度次序为:共价闭环DNA>线性DNA>开环DNA。当琼脂糖浓度太大时,环状的DNA一般不能进入胶内(停留在孔中)。

3、琼脂糖浓度

同样的线状DNA分子在不同浓度的琼脂糖凝胶中的迁移速度不同,DNA电泳迁移率的对数和琼脂糖凝胶浓度呈线性关系,凝胶浓度的选择取决于DNA分子的大小。

琼脂糖凝胶浓度与线性DNA分辨范围

凝胶浓度(%)线性DNA长度(bp)

0.51000~30000

0.7800~12000

1.0500~10000

1.2400~7000

1.5200~3000

2.050~2000

4、电源电压

在低电压时,线状DNA片段的迁移速率和所加电压成正比。但电压增加,琼脂糖凝胶的有效分离范围将缩小。要使大于2kb的DNA片段的分离率达到最大,所使用的电压不得超过5V/cm。

5、电泳方式

用于分离核酸的琼脂糖凝胶电泳可分为垂直型及水平型(平板型)。垂直型电泳,一般用聚丙烯酰胺凝胶做为支撑物。水平型电泳时,凝胶板完全浸泡在电极缓冲液下1-2mm,故又称为潜水式。目前更多用的是后者,因为它制胶和加样比较方便,电泳槽简单,易于制作,又可以根据需要制备不同规格的凝胶板,节约凝胶,因而较受欢迎。

6、嵌入染料的存在

常用的荧光染料EB可以嵌入到堆积的碱基对之间,使其刚性更强,并使其迁移速率有所下降。

7、电泳缓冲液的离子强度

电泳缓冲液的组成和离子强度也能影响DNA的迁移速度。在离子存在很少的情况下(如无用蒸馏水配制凝胶),电导率最小,DNA几乎不移动;在高离子强度的缓冲液中(如误用10×电泳缓冲液),则电导率很高并产热明显,严重时能引起凝胶融化或DNA变性。

大家好,本人是实验新手一枚,目前在学做琼脂糖电泳,我是提取基因组DNA,然后以500ngDNA为模板,按照以下反应体系PCR:Q5高保真热启动2Xmastermix12.5UL;上下游引物终浓度0.5uM,DNA模板500ng,加水补支总体积25ul,反应程序,98℃30s,98℃5S,62℃10s,72℃20s,35或者40个循环,72℃2min,4℃保存,PCR产物取5UL行2%琼脂糖电泳,EB染色,50ul琼脂糖胶加入10mg/mlEB染液5ul,但是结果几乎看不到条带,但是Marker很清晰。最后我把PCR产物用分光光度计测量浓度,发现浓度在400-600ng/ul之间,260/280接近1.80,我想知道我哪里做错了,才导致看不到条带呢?请园子里的老师指教,在此,我首先感谢大家了!

区别是:
biowest agarose 指的是西班牙琼脂糖。
agarose指的是琼脂糖。
如图,用的是1%的琼脂糖,微波炉中低火加热至完全溶解,静置至凝固,跑胶30min,染胶10min,Marker没问题,求指教。


琼脂糖珠培养123
yinj8412021-08-02
有没有人听说过用琼脂糖珠技术做肿瘤细胞迁移实验?
25微升体系总是出现下面的状况,心好累,恳求指导



染色剂用的是EB

同一块gel,有的样品条带很明亮,有的却很暗淡。

求大神告知。

1倍或者0.5倍的TBE溶解,TBE成分为:Tris、硼酸、EDTA的缩写。
TBE作为电泳缓冲液,其中的离子可以导电。并且TE作为DNA的储存液,可以保证DNA免受DNA酶的降解,其中的离子也可以稳定DNA的存在。
琼脂糖凝胶是依靠糖链之间的次级链如氢键来维持网状结构,网状结构的疏密依靠琼脂糖的浓度。一般情况下,它的结构是稳定的,可以在许多条件下使用(如水,pH4-9范围内的盐溶液)。琼脂糖凝胶在40℃以上开始融化,也不能高压消毒,可用化学灭菌活处理。
交联琼脂糖凝胶是生物分离中常用的色谱基质,利用不同的功能基对其表面的羟基进行修饰,进而制备出疏水色谱、离子交换色谱和亲和色谱等商业填料,这些填料在生物大分子的分离纯化中得到了广泛应用。对于修饰凝胶的分离性能,很多研究者都给予了广泛的关注,但凝胶本身的性状如耐压能力以及其微观结构的改变并未受到应有的重视。而这些性状的改变必然影响修饰后材料的应用范围且与其分离性能存在内在的联系,因此本文以羰基二咪唑(CDI)这种常见的羟基活化剂活化交联琼脂糖凝胶,键合不同功能基,考察修饰后凝胶其耐压能力和微观结构的变化,寻找其中的规律,为以交联琼脂糖凝胶为基质的色谱填料的应用提供参考。

染料是Genviews的GenGreen的。图中MarkerNEB的1KBLadder,我相信marker本身是没什么问题的,但我的电泳系统跑出来总是会出现这种弯弯的现象,有可能是什么原因呢?好像随着电泳时间的延长,会弯的更明显。



琼脂和琼脂糖不光中文叫法有点区别,它们的英文名字也是不同的。先来说说琼脂,它的英文名为agar。这个词来源于马来语的agar-agar,意思是胶状物。而琼脂糖的英文名为agarose,天然琼脂agar由琼脂糖(agarose)和琼脂果胶(agaropectin)组成。
琼脂糖是线性的多聚物,基本结构是1,3连结的β-D-半乳呋喃糖和1,4连结的3,6-脱水α-L-半乳呋喃糖。琼脂果胶是由许多更小的分子组成的异质混合物。它们的结构相似,但带硫酸根和羧基组分,凝胶能力差。
琼脂糖(Agarose)的特性详细介绍可以登录生物帮看看, http://www.bio1000.com/news/cp/ 生物产品,生物学新技术,生物研发,生物产业,生命科学创新产品。
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