- IHC
- IHC - Paraffin (20 µg/ml)
- Western blot (1:500 - 1:3000)
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LifespanBiosciences公司是分子病理学行业的领头军，销售抗体、免疫组化服务以及蛋白质定位数据库。1995年创立的LifeSpanBiosciences已开发了针对药物标靶主要种类的专有抗体，用以研究这些蛋白质在人正常和患病组织中的表达。LifeSpanBiosciences在高通量成像和癌症鉴别软件产品中也处于领先地位，正在开发用于在在临诊前期毒理学和癌症诊断方面进行病理学解读的仪器和软件。
关于LifeSpanBioSciences，Inc.（LSBIo）LifeSpanBioSciences为全球研究人员提供高质量的抗体，蛋白质，生化试剂，ELISA和化验试剂盒，免疫组化数据和服务。由Drs。于1995年创立。约瑟夫·布朗和格兰纳·伯默（LSG）成立于LSBio，是一家分子病理学公司，致力于IHC在人体疾病组织中的蛋白质定位。通过执行数千项IHC研究以及生成和测试成千上万种抗体获得的经验，LSBio已成为抗体行业的世界领导者，并以卓越的声誉而著称。 LSBio拥有针对20,000个靶标的550,000单克隆和多克隆抗体目录。抗体可用于大多数物种和所有主要研究应用，例如免疫印迹，IHC，免疫荧光和荧光激活的细胞分选。通过广泛的正在进行的内部测试，这些抗体中的14,000多种也被鉴定为特殊的IHC试剂，并获得了IHC-plus™品牌。 LSBio还提供30,000种高质量的免疫测定，包括夹心ELISA（酶联免疫吸附测定）试剂盒，竞争性EIA（酶免疫测定）试剂盒以及基于细胞和DNA结合的试剂盒。 LSBio还提供45,000种天然蛋白提取物以及经过工程改造的重组蛋白，其形式为细胞裂解液或高度纯化的试剂。 最近，LSBio发布了他们不断增长的化验试剂盒和生化试剂系列，旨在补充研究社区的其他产品线。 十多年来，研究人员一直依靠LSBio的专业知识来满足其分子病理学外包需求。LSBio的服务包括：抗体生产和鉴定，定制的IHC研究（由庞大的档案人类组织库支持）以及组织交叉反应性筛选。 LSBio坚持其产品和服务的质量，并提供无与伦比的客户服务和支持。在未来的几年中，LSBio计划继续扩大其高质量蛋白质组学产品的目录，为客户提供出色的试剂，服务和支持，以加速他们的研究。
免疫组织化学服务与LifeSpan合作设计定制的免疫组织化学，以解决您的特定生物学问题。将整个定位过程外包，而不必担心寻找和表征靶标特异性抗体，寻找和鉴定难以发现的组织，并具有解释与复杂的人类病理学有关的免疫染色的能力。TCR筛选服务在免疫组织化学中针对大量正常的冷冻人类组织类型测试您的治疗性抗体，以确定潜在的意外结合。我们的非GLPTCR服务是根据FDA的建议设计的，该建议在其“用于人类的单克隆抗体产品的生产和测试要考虑的要点”中概述。免疫组织化学验证抗体的领导者新冠肺炎LSBio提供了许多与冠状病毒有关的产品，包括抗体，蛋白质，检测试剂盒和可表达的ORF克隆。SARS-CoV-2/COVID-19冠状病毒检测冠状病毒和COVID-19抑制剂冠状病毒蛋白质组学细胞因子释放综合征一般冠状病毒信息抗体我们收集了针对大多数靶蛋白的565,268单克隆和多克隆抗体。它们涵盖了所有主要的研究物种，应用，并且有多种共轭形式。我们的IHC-plus™抗体非常适合用于FFPE人体组织免疫组织化学。所有抗体Path- Plus ™癌症病理抗体Path- Plus ™神经抗体原发性抗体Path- Plus ™癌症抗体二抗IHC- Plus ™抗体同型对照ELISA和测定试剂盒我们的传统三明治，竞争性EIA和直接ELISA试剂盒提供了一种定量测量数千个目标靶标的方法，而我们的基于细胞和DNA结合的ELISA试剂盒是进行体外研究和转录因子分析的理想选择。化学发光CLIA试剂盒可对低拷贝靶标进行高灵敏度检测，我们的开发试剂盒使研究人员能够经济高效地进行大量测定。我们不断增加的化验试剂盒集合为研究人员提供了监测多种生物过程的方法，例如细胞凋亡，细胞增殖，新陈代谢等。所有套件检测试剂盒传统ELISA试剂盒基于细胞的ELISA试剂盒磷酸特异性ELISA试剂盒DNA结合ELISA试剂盒ELISA开发试剂盒化学发光CLIA试剂盒蛋白质类蛋白质可用于各种各样的应用中，例如用于功能测定的开发，小分子筛选，原位受体活化或仅用作WesternBlot的对照。我们提供提取的天然蛋白和重组蛋白，其形式为细胞裂解物，或者从细菌或哺乳动物表达系统中纯化。许多蛋白质具有生物活性并经过认证的低内毒素。所有蛋白质重组蛋白天然蛋白质过表达裂解物生物活性蛋白无动物蛋白合成肽细胞和组织产品LSBio提供广泛的细胞和组织产品，包括FFPE组织切片，面板和阵列，第一链CDNA，基因组DNA，总RNA，细胞和组织裂解物，以及各种相关的测定试剂盒。所有细胞和组织产品组织切片和阵列细胞和组织裂解液RNA和DNA提取物分子生物学LSBio提供了超过13,000个cDNA的广泛选择，每个cDNA均可在克隆载体或十四种不同的即用型表达载体之一中获得。cDNA/ORF克隆是研究蛋白质功能和基因表达的基础。经过验证的表达就绪ORF克隆为研究人员提供了直接启动蛋白质分析和表达研究的选择，而无需花费宝贵的时间进行RNA分离，cDNA合成，框内克隆和测序。所有分子生物学产品cDNA克隆表达就绪的ORF克隆免疫组化试剂LSBio提供设计和执行定制免疫组织化学实验所需的所有组件，从抗原回收到盖玻片。用于AP或HRP底物开发的高质量，值得信赖的品牌封闭剂，检测柱和Avidin-Biotin系统。使用我们的鼠标鼠标和多路检测系统，轻松完成具有挑战性的项目。所有IHC试剂抗原提取封闭剂检测聚合物ABC检测试剂盒基材特别/柜台污渍安装介质免疫组织化学数据和服务在过去的20年中，我们进行了1000项自定义IHC研究。我们的病理学家团队在设计有效的IHC研究和解释与正常和疾病过程相关的结果方面经验丰富。这些服务得到了我们庞大的组织库的支持，该组织库几乎包含每种组织类型和疾病。定制免疫组织化学研究组织交叉反应筛选免疫组织化学报告IHC-plus™抗体关于我们的组织银行生化产品特色产品类别包括激动剂，拮抗剂，抑制剂和调节剂，可满足您的生物医学研究需求。高质量的产品可用于癌症研究，心血管疾病，细胞生物学，脂质研究，免疫学，新陈代谢，神经科学，氧化损伤和毒理学。所有生化试剂
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虽然没有具体用过检测这个抗原的抗体，但是如果希望抗体特异性好点，能检测丰度低的蛋白，还是选Abcam吧，Santa有时候全凭人品了，内参抗体什么的还能凑活，其他的比较勉强。
我觉得封闭这一步时间长短多少并不能减少背景…背景过深多半还是抗体浓度过大…不管一抗还是二抗过大都会使背景加深…一抗的浓度不一定是条带清晰就是最佳了…联系进一步优化一下
这个主要还是抗体的问题，WB最主要的还是要选择一个特异性较好的抗体，抗体是整个实验的重中之重
各位大神，有谁做WB，选用球虫的GADPH作为内参？知道哪个公司有针对球虫内参的抗体？
所以免疫组化在组织定位和定性上比较准确，但是在定量上不够准确。
western blot也是利用抗体和抗原之间的结合具有高度的特异性。经过聚丙烯酰胺凝胶电泳分离的蛋白质样品，转移到固相载体上，固相载体以非共价键形式吸附蛋白质，且能保持电泳分离的多肽类型及其生物学活性不变。以固相载体上的蛋白质或多肽作为抗原，与对应的抗体起免疫反应，再与酶或同位素标记的第二抗体起反应。
western blot因为有内参标定，所以在定量上要更加准确。但是在组织定位上不如免疫组化
一.样本种属来源：
首先要考虑的就是实验样本来源于什么物种。
1、哺乳动物的组织或者细胞样本，通常选择β-actin、β-tubulin、GAPDH、Lamin B、Histone H3、Na,K atpase等。
2、植物来源实验样本，则可以选择plantactin、Rubisco等。
3、其他来源样本研究较少，所以就应该参照文献报导，选择合适的蛋白作为内参。
二.目的蛋白分子量：
选择内参抗体时，应该考虑目的蛋白分子量的大小。通常应该保证目的蛋白与内参蛋白分子量相差5KD以上。比如目的蛋白分子量为45KD，此时不适宜选择β-actin作为内参，可以考虑选择GAPDH或者β-tubulin作为内参。
三.目的蛋白表达部位：
就一般的蛋白检测来说，β-actin、β-Tubulin抗体等就可以了，而针对于核蛋白的定量，特别是样本蛋白就是核蛋白时，选择恰当的核蛋白内参则更能体现内部参照的价值。常用的核内参抗体有Lamin A、Lamin B、Histone H3，除此之外，其它常见的核蛋白内参还有PCNA、K70、K80等，在一些文献报道中，Erk2、TATA binding protein(TBP)以及c-Jun、c-Fos等都有使用。而对于膜蛋白检测，常用的内参抗体为Na,K ATPase。对于线粒体蛋白的检测，常用VDAC1和COX IV作为内参抗体。
以上几条原则只是针对通常情况，但是需要注意的问题是——内参的选择需要考虑实际的试验环境，比如某些细胞中，由于组织缺氧、糖尿病等因素会导致GAPDH的表达增高，不适合做内参。比如在涉及细胞增殖相关试验中，c-Jun由于自身表达变化就不适合做内参;而在凋亡实验时，TBP、Lamin等也不适合作为内参。因此设计实验方案的时候应该考虑这些因素并查询相应文献，在实验过程中也应该注意如果内参表达出现异常，应考虑这方面因素。
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