ProductDescription
Vitronectinisa478aminoacidprotein(1-19aa=signaldomain)thatbelongstoamemberofthepexinfamily.Vitronectinisanabundantglycoproteinfoundinserumandtheextracellularmatrix.ItpromotescelladhesionandspreADIng,inhibitsthemembrane-damagingeffectoftheterminalcytolyticcomplementpathway,andbindstoseveralserpinserineproteaseinhibitors.Itisasecretedproteinandexistsineitherasinglechainformoraclipped,twochainformheldtogetherbyadisulfidebond.Vitronectinhasbeenspeculatedtobeinvolvedinhemostasisandtumormalignancy.
RecentpublicationsindicatedthatcoatedrecombinanthumanvitronectinproteinalonebenefitsiPScellgenerationwhencombinedwithE8culturemedium.Theproducthasalsobeenshowntobeanexcellentcoatingmatrixmaterialfor11R-taggedrecombinantTFintracellulardeliveryforproteinderivediPSprotocolwithextremelylowlevelsofnon-specificinteraction.RecombinanthumanVitronectingene(20-398aaFragment)wasconstructedwithcodonoptimizationandexpressedinnon-fusionproteinforminE.coliasinclusionbodies.Thefinalproductwasrefoldedusingaunique“temperatureshiftinclusionbodyrefolding”technologyandchromatographicallypurified.
Vitronectinisidealforcoatingofsurfaces.Theoptimalconcentrationforcellattachmentandculturemaydifferforvariouscelltypes.Vitronectinhasbeenusedatafinalcoatingconcentrationaslowas50ng/cm2onplasticware.Further,coatingthisrecombinantproteinat5–10µg/well(6wellplateineitherNutriStemorE8mediumcanbeusedforhumaniPScellgenerationinvitro.Itisprovidedinuser-friendlypackagingforuseandstorage.Vitronectinissterilefilteredandissuppliedasareadytousesolutionafterthawingandconcentrationadjustment.
Parameter,Testing,andMethod | RecombinantVitronectin#5121 |
Quantity | 0.5mg |
Volume | 1mL |
Concentration | 0.5mg/mL |
Purity-SDSPAGEElectrophoresis | >90% |
Formulation | 20mMpH8Tris-HCLbufferwithproprietaryformulationofNaCl,KCl,EDTA,Arginine,DTTandGlycerol |
Form | Solution |
Source | Recombinant-E.Coli |
StorageTemperature | -20°Cor-70°Cforlongtermstorage |
ShelfLife | Minimumof6monthsfromdateofreceipt |
SterilizationMethod | Filtration |
CellAttachmentAssay | Passes |
AccessionNumber | NP_000692 |
DirectionsforUse
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CoatingProcedure:
Usetheserecommendationsasguidelinestodeterminetheoptimalcoatingconditionsforyourculturesystem.
- ThawVitronectinanddilutetodesiredconcentrationusingserum-freemediumorPBS.Thefinalsolutionshouldbesufficientlydilutesothatthevolumeaddedcoversthesurfaceevenly.
- Addappropriateamountofdilutedmaterialtoculturesurface.
- Incubateatroomtemperaturefor1-2hours.
- Aspirateremainingmaterial.
- RinseplatescarefullywithdH2O–avoidscratchingbottomsurfaceofplates.
- Platesarereadyforuse.Theymayalsobestoredat2-8°Cdamporairdriedifsterilityismaintained.
ProductApplications
CoatingrecombinanthumanVTNproteinforESoriPScellculturecanbeeasilyperformedasfollowing:
1.Add1mlPBSbuffertoasinglewellof6wellplate,andmixwellwith10ugrecombinantVTN(20ulsolution,0.5mg/mlofVTNstockingsolution).
2.Placecultureplateat4°Cforovernight.
3.PlatesarereadyforroutineESculture.(RemovecoatingPBSbufferbeforecellculture).
ProductReferences
VitronectinReferences:
Wiley,LukeA.,etal."Usingpatient-specificinducedpluripotentstemcellsandwild-typemicetodevelopageneaugmentation-basedstrategytotreatCLN3-associatedretinaldegeneration."Humangenetherapy27.10(2016):835-846.
Wiley,LukeA.,etal."Generationofxeno‐free,cGMP‐compliantpatient‐specificiPSCsfromskinbiopsy."CurrentprotocolsinstemcellBIOLOGy42.1(2017):4A-12.
Dwyer,SheilaFigel,LingqiuGao,andIrwinH.Gelman."Identificationofnovelfocaladhesionkinasesubstrates:RoleforFAKinNFκBsignaling."Internationaljournalofbiologicalsciences11.4(2015):404.
Wiley,LukeA.,etal."cGMPproductionofpatient-specificiPSCsandphotoreceptorprecursorcellstotreatretinaldegenerativeblindness."Scientificreports6(2016):30742.
Kittur,Harsha,etal."ProbingCellAdhesionProfileswithaMicroscaleAdhesiveChoiceAssay."Biophysicaljournal113.8(2017):1858-1867.
Dwyer,SheilaFigel,andIrwinH.Gelman."Cross-phosphorylationandinteractionbetweenSrc/FAKandMAPKAP5/PRAKinearlyfocaladhesionscontrolscellmotility."Journalofcancerbiology&research2.1(2014).
Worthington,KristanS.,etal."Two-photonpolymerizationforproductionofhumaniPSC-derivedretinalcellgrafts."ActaBiomaterialia55(2017):385-395.
ProductCertificateofAnalysis
SafetyandDocumentation
SafetyDataSheet
CertificateofOrigin
ProductDisclaimer
ThisproductisforR&Duseonlyandisnotintendedforhumanorotheruses.PleaseconsulttheMaterialSafetyDataSheetforinformationregardinghazardsandsafehandlingpractices.
美国AdvancedBioMatrix(简称ABM) www.advancedbiomatrix.comAdvancedBioMatrix(简称ABM)是美国一家著名的生物公司,获得了AllerganInc的授权(Allergan用25年时间不断完善胶原蛋白相关的产品的生产工艺),将Allergan的专业和技术用于蛋白生产与检测,致力于为组织工程、细胞分析及细胞增殖等研究领域提供优质稳定的产品。AdvancedBioMatrix不断丰富已有产品线,目前可为三维细胞培养提供各种胶原蛋白、纤连蛋白、玻连蛋白、水性凝胶、不同粘度与分子量的透明质酸以及低代成纤维细胞等。在美国全部产品授权Sigma销售。AdvancedBioMatrix是组织培养,细胞分析和细胞增殖三维(3D)应用的生命科学领域的领导者。我们的产品被公认为纯度,功能性和一致性的标准。我们在生产,分离,纯化,冷冻干燥,细胞培养和蛋白质测试,粘附肽,附着因子,底物刚性和其他3D矩阵产品方面拥有丰富的专业知识。我们的专业技术和知识正在被用来确保我们的产品质量最高,批次之间一致且易于为我们的研究客户使用。
美国AdvancedBioMatrix是3D组织培养、细胞检测和细胞增殖等领域实验解决方案的佼佼者。AdvancedBioMatrix在分离、纯化、冻干、细胞培养和蛋白检测、多肽粘附、附着因子、基质硬度和其他3Dmatrix 产品开发方面有着丰富的经验。AdvancedBioMatrix的研发经验和专业知识确保其产品可达到最佳质量,并保证产品之间一致性,方便研究客户使用。以下为AdvancedBioMatrix3DMatrices 产品竞争优势:1. 提供高纯度和成分确定的胞外基质;2. 超过1000余篇文献引用PureCol产品,品质非常均一;3. 在3D培养基领域可提供最全面的产品线;4. 唯一可提供特异性刚性有机硅基板的公司(CytoSoft);5. 唯一可提供可溶性丝纤蛋白的供应商(可运用于多种3D培养);6. 如果客户首次接触3D胶原凝胶,AdvancedBioMatrix还是唯一的预制胶原蛋白(PureColEZGel)供应商;
以下产品为AdvancedBioMatrix全球畅销品:1.PureCol 牛源I型胶原蛋白 3mg/ml#5005-100ML2.Nutragen牛源I型胶原蛋白 6mg/ml#5010-50ML3.FibriCol 牛源I型胶原蛋白 10mg/ml#5133-20ML4.VitroCol 人源I型胶原蛋白 #5007-20ML5. 弹性蛋白原 #5052-1MG6.ECMSelectArraykitUltra-36#5170-1EA7.CytoSoft(刚性可变的基底,AdvancedBioMatrix最新添加产品5190-7EA)8. 人III型胶原蛋白 #5021-10MG9. 人IV型胶原蛋白 #5022-5MG10.SilkFibroin溶液 #5154-20ML11.Fibronectin#5080-5MG12.Vitronectin#5051-0.1MG
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防止包涵体常用的方法:使用中等强度或弱的启动子,低温培养,有限的诱导,优化培养基条件,进行融合表达,与伴侣分子和折叠酶共表达,表达定位于不同的空间,选择突变的菌株或其他的原核表达系统。
增加蛋白质折叠的添加剂:添加剂可能的作用机制甘油对蛋白质具有优先的水合作用/增加黏度L-精氨酸两亲分子/渗压剂甘氨酰甜菜碱/山梨糖醇 对蛋白质具有优先的水合作用阿拉伯聚糖 增加黏度木糖醇 增加黏度乙醇 调节极性DMSO 调节极性
两性离子表面活性剂(Zwitterionic detergents)保护非极性表面Triton X-100保护非极性表面硫代甜菜碱类物质(NDSBs)保护非极性表面蔗糖/海藻糖对蛋白质具有优先的水合作用/增加黏度N-氧化三甲胺(TMAO)对蛋白质具有优先的水合作用/渗压剂三氟乙醇(TFE)促进二级结构的形成低浓度盐酸胍使部分折叠的中间体不稳定/增加天然构象蛋白质的溶解性低浓度尿素使部分折叠的中间体不稳定/增加天然构象蛋白质的溶解性配体稳定天然结构状态聚乙二醇保护熔球体(molten globule)/增加黏度需要强调的是在培养细菌时,在培养基中加入5%的乙醇可以起到一定的防止包涵体产生的作用。
对比另外一篇文章:
减少包涵体形成的策略降低重组菌的生长温度,降低培养温度是减少包涵体形成的最常用的方法,较低的生长温度降低了无活性聚集体形成的速率和疏水相互作用,从而可减少包涵体的形成。2. 添加可促进重组蛋白质可溶性表达的生长添加剂,培养E.coli时添加高浓度的多醇类、蔗糖或非代谢糖可以阻止分泌到周质的蛋白质聚集反应,在最适浓度范围内添加这些添加剂不会影响细胞的生长、蛋白质的合成或运输,其它促重组蛋白质可溶性表达的生长添加剂还有乙醇(诱导热休克蛋白的表达)、低分子量的巯基或二硫化合物(影响细胞周质的还原态,从而影响二硫键的形成)和NaCl。3. 供给丰富的培养基,创造最佳培养条件,如供氧、pH等。
生物制品细胞制备过程中不得使用青霉素或β-内酰胺(β-Lactam)类抗生素,明确表明不准使用青霉素。那么进行的重组蛋白类表达的微生物发酵,可以用青霉素吗?
2、2015版药典三部,各论中指出,”将检定合格的工作种子批菌种接种于适宜培养基(可含适量抗生素)中培养“,”发酵用培养基(采用适宜的不含抗生素的培养基)“。
这里说明种子培养基中可以使用抗生素,而且也没有限定究竟是哪种抗生素。
3、关于发酵中使用的抗生素,不知大家一般用哪家的,一些常用的,氨苄西林钠,硫酸卡那霉素,氯霉素等,都是用的什么级别,那个厂家的呢?我现在生工的,阿拉丁的,生兴生物的都用过。主要还是用的生工生物的,但是生工生物的抗生素都是进口分装的,不仅仅抗生素,国内很多进口分装的试剂,都无法提供相应的产品质量检测证书。而且因为是分装的,基本也就属于只有销售,所以,以后真的生产了,原材料来源的稳定性也无法保证。请问这个问题,大家是怎么解决的,一般用的哪家的呢。
基因重组只是控制同一性状表达不同而已,但是它不会改变性状的基本情况。如:控制眼睛颜色的基因,亲本的基因重组之后可能亲本为黑色,子代便为蓝色。但绝对不会控制眼睛颜色的基因在重组之后就变成控制耳朵的基因。
国内或者国外进口皆可!?看来你不缺钱啊!
这个问题问的过于笼统!
首先,蛋白表达与纯化包括很多种类型,比如原核蛋白表达,哺乳动物蛋白表达,酵母蛋白表达以及昆虫蛋白表达等等,而现在生物实验中常说的蛋白表达纯化通常是指利用大肠杆菌表达系统的原核蛋白表达,这种表达方式比较简单,普遍都可以做。但是如果是指很多种蛋白表达系统的话,可以做的单位就比较少了。
另外,蛋白的表达成功与否还需要取决于蛋白的性质,所以前期一定要问清楚!
各位业内前辈,我们正在考虑引进符合GMP认证标准的CHO细胞系,用于表达可做疫苗生产的重组蛋白类。目前已有符合标准信息的是Thermofisher的CHO-S悬浮培养细胞资料,希望能再多了解一些和这株细胞类似的其他公司符合GMP标准的生产株细胞做个比较。谢谢指教!
植物:抗虫、抗病、抗除草剂植物培育、改良作物品质(富含赖氨酸的玉米)
动物:提高生长速度、生产药物蛋白、器官移植、乳腺生物反应器
微生物:疫苗
基因治疗等等
大家好,想请教大家一个关于HPLC方法学的问题。
目前我们做的一个蛋白药,没有标准品,液相建立一个方法只想用于纯度鉴定,不去定量,这个方法所得到的图谱就一个主蛋白峰,面积归一化法相当于100%,现在就这个方法的方法学验证提出下面几点疑问:
1.因为我只做纯度鉴定,这个方法的方法学应该做系统适用性、专属性、检测限、耐用性和精密度这些,还是按照定量的全套加上定量限、线性、范围、准确度这些?
2.纯度鉴定中,我觉得应该对杂质进行定量,但是我们的这个方法只有一个主蛋白峰,几乎没有杂质峰,这样的话这个方法学我应该以什么为标准证明纯度呢?需将样品进行适当的氧化、酸、碱破坏吗?然后证明破坏后主峰能和产生的杂质分开?
3.对应生物蛋白药的杂质,应该属于无法获得的,如果通过强破坏,这个杂质也是不好鉴定的,是不是我只需要知道主峰能和强破坏的降解物分开,就可以说方法建立成功?还是生物药没有必要做这个强破坏,简单的走一下系统适用性、专属性、检测限、耐用性和精密度这样的流程就行?
说的有点乱,主要是自己对这个生物药的HPLC纯度鉴定的方法学,实在是疑惑重重,希望有经验的大侠能帮忙解答下。非常感谢!
生物合成人胰岛素注射液,比如诺和灵R笔芯。是单一品种、不是混合的胰岛素。是不含鱼精蛋白的短效胰岛素。
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