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His标签单抗
来自 : mayitao

His标签单抗又叫6×His标签单抗,或6×His单克隆抗体,用小鼠制备,HIS可被镍柱吸附,用于纯化重组蛋白。

  • 中文名

  • His标签单抗

  • 外文名

  • anti-6*Histagmonoclonalantibody

  • 又叫

  • 6×His标签单抗

目录
  1. 1定义

  2. 2标签鼠单抗

  3. 3背景介绍

His标签单抗定义

His标签单抗,又叫6×His标签单抗,或6×His单克隆抗体,英文全称为anti-6*Histagmonoclonalantibody,因为制备单抗的实验动物多为小鼠,所以小鼠来源的His标签抗体英文全称为Mouseanti-6*Histagmonoclonalantibody。目前市场上用到的His标签单抗基本都是用小鼠制备的,尚未有商品化的兔源His标签单抗。

His标签单抗标签鼠单抗

以实验小鼠为宿主制备的His标签单抗叫His标签鼠单抗。其制备方法通常是这样的:人工合成6*His多肽,即氨基酸序列为HHHHHH的多肽,必要时在末端添加偶联载体用到的特殊氨基酸。合成好此多肽后,通过化学方法将此多肽与载体蛋白偶联(如KLH、BSA、OVA等),偶联完成后,再用偶联好的全抗原免疫实验小鼠,免疫结束后杀死免疫好的小鼠,无菌条件下取脾脏,与骨髓瘤细胞进行融合,用ELISA或者其它手段进行筛选出阳性的克隆,筛选到的细胞经过克隆化后即形成稳定的细胞株,将此细胞株进行体外培养或小鼠体内诱生腹水形成,再从培养基或者腹水中纯化即可得到His标签鼠单抗,再用Westernblot或其它手段进行鉴定即可。[1]目前世界上有很多公司都提供商品化的His标签单抗,右图是ProteintechGroup的His标签单抗(产品编号66005-1-Ig)的Westernblot结果,可见在曝光时间为1min的情况下,抗体稀释16万倍仍可检测到很强信号。[2]

Proteintech His标签单抗质检数据ProteintechHis标签单抗质检数据

His标签单抗背景介绍

His标签是蛋白质重组技术中经常用到的一种标签,其序列为六个组氨酸HHHHHH,其特点是分子量小,基本不改变蛋白质的生物结构,不改变蛋白质的溶解性,更重要的是它使蛋白质的纯化变得极为方便,根据组氨酸上的咪唑环可以与二价金属离子结合的原理,人们可以利金属离子亲和层析技术纯化带有His标签的蛋白,即将含有目的蛋白的裂解液通过固定的二价金属离子(通常是二价Ni离子)填料,带有6*his标签的蛋白质即与填料结合,其它蛋白不与填料结合,最后再用高浓度的咪唑即可将目的蛋白洗脱下来。[3]

His标签单抗可以用来鉴定His标签的蛋白质的表达情况(如目的蛋白的相对表达量、分子量)、在细胞中的定位以及其它特性。

  • 参考资料


    • 1.J.E.科学根,D.H.马古利斯.精编免疫学实验指南.北京:科学出版社,2009:18-33

    • 2.Histagantibody.Proteintech[引用日期2012-06-28]

    • 3.Polyhistidine-tag.Wikipedia[引用日期2012-06-28]

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