Luciferase is the general term given to a class of oxidative enzymes that catalyze reactions that give off light, a process known as bioluminescence (Fig. 1). In biology, researchers can take advantage of this reaction and use it as a readout for various biological processes. This has perhaps been exploited most in luciferase reporter cell lines where a promoter region from a gene of interest is placed immediately upstream of the coding sequence for luciferase. In this system, transcriptional activation of the gene of interest leads to a level of luciferase expression that is proportional to the level of gene activation. The level of activation is then assessed by lysing the cells and adding the luciferase substrate, D-luciferin. Using the One-Step Luciferase Assay System, this is accomplished in a single step as the lysis buffer has been formulated with D-luciferin. After a brief incubation period, bioluminescence is read on a luminometer.
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如题。实验室只有冰冻切片机,但标本已制成石蜡包埋的标本,问能否用冰冻切片机来切?还是一定得用石蜡切片机切片?
一、直接冰冻切片法
冰冻切片多用于新鲜组织、甲醛固定组织和冰箱冷藏组织等。组织块不经任何包埋剂而直接放在制冷台上冷却后再进行切片。
1.恒冷箱切片就是将组织在恒冷箱的切片机切片。目前恒冷箱切片机的品种较多。此种切片适用于科研和教学上的连续切片。要求预先开动电源(预冷准备),配多种固定组织台,以便更换组织。
2.甲醇制冷器制冷箱为附有带导管的制冷台和制冷刀的甲醇循环装制,其冷却速度比较快,属于开放式,作一般常规冰冻切片用。
3.二氧化碳冰冻法将组织用蒸馏水洗后,放在冰冻切片机的冷冻台上,加蒸馏水少许。打开冷冻台的二氧化碳开关,二氧化碳气体喷出,待组织出现冷霜时,将二氧化碳关闭,即可切片。若组织冷冻过硬则切片易碎;组织冷冻硬度不足,则切片呈粥糜状,需用间歇方法继续冷却。硬度一般在刚开始解冻时最合适,应迅速切片。
4.半导体致冷冰冻切片法将组织置半导体致冷台上,滴加少许蒸馏水,调好切片机的厚度。先接通热器的循环流水,然后接通电源,电源的正负极切勿接反,用整流电源控制温度。
二、明胶冰冻切片法明胶包埋法一般多用于冰冻切片易破碎的组织,特别是某些有树枝状突起的组织,当其切片后投入水中时,常常引起分散,甚至发生丢失,某些间隙较多的组织,有时会因发生散乱而失去相互间的联系,可形成移位现象。明胶冰冻切片正是适用于上述情况。
⑴环保组织固定液固定后必须充分水洗,洗净。因甲醛对明胶有凝固作用,从而影响明胶溶液浸入组织内部,不宜选用含甲醛类固定液。
⑵组织水洗后浸入12.5%明胶水溶液(以1%石碳酸水溶液配制),于37℃温箱浸6-24h。
⑶移至25%明胶溶液内浸6-24h。
⑷25%明胶包埋,连同包埋器放入冰箱内使明胶迅速凝固,取出后在空气中蒸发10min。
⑸入环保组织固定液固定明胶块1-2日。
⑹蒸馏水洗后,置冰冻切片机或滑动式切片机切片。切片可保存于10%甲醛液中。
⑺依检查目的而进行染色,染色后一般不经乙醇脱水及二甲苯透明,而用下述明胶溶液或其他类似的明胶溶液封片:果糖26g,明胶1.1g,钾矾0.75g,麝香草酚水溶液1.15ml。
先将果糖溶于麝香草酚饱和液,置于56℃温箱内12h,加明胶后在水浴内加温熔化,
湖北孝感阔海医疗科技有限公司成立与2008年。是一家集科研、生产、经营于一体的高端病理仪器生产企业,公司座落于武汉城市圈、著名的“董永故里”孝感市,2011年,公司新增2万平方米的现代化生产加工基地——“赢海科技工业园”。
目前公司同全国一流的病理专家进行了广泛和卓有成效的合作,数十家国内知名医疗器械专业经销商合作单位在经营和服务我们的产品,有近三十个省市区的近几百家大中型医疗机构正在使用我们的产品,我们坚持以“优越的性能,先进的技术,周到的售后”为理念服务于用户。
阔海医疗科技有限公司拥有一支由博士、硕士、高级工程师及应用专业人才组成的核心技术班底、依托066基地航天企业加工工艺和武汉高校林立的雄厚科技实力,与国内外知名企业和科研院所开展广泛的合作,重点开发出一系列全面替代进口的产品:KH-T生物组织智自动脱水机,KH-B生物组织自动包埋机,KH-P恒温摊烤片机,KH-S生物组织自动染色机,KCT液基细胞超薄自动制片机,液基细胞保存液,KH-Q切片机,KPS-3000多功能真彩病理图像系统及相关病理耗材等。展开
第二要用到包埋机,用于包埋蜡
第三要用到切片机,用于切蜡片
第四要用到烘片机,要把玻片烤干
第五要用到染色机,要把组织上色
第六要用到封片机,要在载玻片上放盖玻片
第七要用到显微镜,要看成片
第八可能要用到取材台,取组织时要用到
第九可能要用到冰冻切片机,冰冻切片时要用到
基本上病理科的设备就是这些了,这些设备里面,切片机和显微镜是最重要的,一般要选择进口的效果会比较好。我们医院用的是徕卡的。其他的没有那么多要求,可以根据自身条件选择。
所以在考虑换一种蜡试试,因为几乎每天都要做石蜡切片,所以比较急,可是已经很长时间了也没找到合适的.
做组化的同学及老师们有没有自己用过,而且觉得好用的蜡推荐一下啊?
不甚感激啊!
包埋机,又称生物组织包埋机或者石蜡包埋机,是对人体或动植物标本经脱水浸蜡后进行组织蜡块包埋,以供切片后作组织学诊断或研究的设备,适用于医学院校、医院病理科、医学科研单位、动植物科研单位和食品检测等部门使用。
二.包埋机作用及原理
由于生物样品各种组织成分不同,因此性质也各异,如软硬程度,疏松、致密程度,面积大小等都不相同,自然状态下要将它们切成十几微米甚至几个微米的薄片,几乎是办不到的。包埋的原理就是将某些特殊的支持物质浸入到组织块内部,利用支持物质的物理特性,如由液态转变成固态,使整个组织具有均匀一致的固态结构和足够的硬度,以利于用切片机制取极薄的切片。组织学切片技术中最常用的一种包埋方法是利用石蜡作为包埋剂,将浸过蜡的组织块置于石蜡内制成蜡块。
由于组织是柔软的,或局部的软硬不均,使用常规技术制作切片或超薄切片时制作厚薄均匀的切片是困难的,所以有必要用一定物质浸透组织内部,整个组织一样硬化,先将熔化的石蜡注入包埋托内(模具),而后用镊子将经过浸蜡的组织块从脱水盒中取出,放入包埋托中央,放在小冷台上,用镊子轻按组织块,以达到组织块平整,盖上脱水盒底,再加好石蜡,移至冷冻台上,待冷冻好后,卸下组织蜡块待切。?
包埋机不仅用于观察正常细胞组织的形态结构,在病理学和法医学等学科用以研究、观察及判断细胞组织的形态变化的主要方法,而且也已相当广泛地用于其他许多学科领域的研究中;教学中,为达到光镜下观察切片标本。包埋解决方案帮助您确保正确的组织定位、避免出现热损坏并创造出理想的组织块形状。
三.包埋机清洁注意事项
每次清洁仪器之前,要注意关闭仪器,并拔下电源插头。
处理清洁材料时,请遵守制造商的安全规定以及所在国家的现行实验室规定。
清洁期间,不得有任何液体渗入仪器内部。
为防止刮伤仪器表面,在任何情况下均不得使用带有锋利边缘的金属工具。
工作表面的清洁:
适合去除石蜡的所有实验室常用清洁产品(例如,Paraguard或二甲苯替代品)均可用于清洁工作区。
仪器和外部表面的清洁:
必要时,请用温和的家用清洁剂或肥皂水清洁喷漆的外表面,并用湿布擦拭。
避免有机溶剂长时间接触仪器表面。不得在喷漆表面使用二甲苯或丙酮。
版主tk57ml留言:
就这么从别人的网站复制粘贴过来的?
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