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Synaptic Systems(SYSY)/GluA1 - 182 003/182 003
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Synaptic Systems(SYSY)/GluA1 - 182 003/182 003
品牌 / 
SYSY
货号 / 
182003
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Cat.No.18200350µgspecificantibody,lyophilized.Affinitypurifiedwiththeimmunogen.AlbuminwasaddedforstABIlization.Forreconstitutionadd50µlH2Otogeta1mg/mlsolutioninPBS.Thenaliquotandstoreat-20°Cuntiluse.
ApplicationsWB:1:1000(APstaining)galleryIP:yesICC:1:500(seeremarks)galleryIHC:nottestedyetIHC-P/FFPE:nottestedyet
ImmunogenRecombinantproteincorrespondingtoAA828to906frommouseGluA1(UniProtId:P23818)
ReactivityReactswith:human(P42261),rat(P19490),mouse(P23818).Nosignal:zebrafish.Otherspeciesnottestedyet.
SpecificitySpecificforGluA1.(K.O.verified)
matchingcontrolprotein/peptide182-0P
Remarks

ICC:Onlymethanolfixation,recommendedprotocol.

Datasheet182_003.pdf
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Home-made Taq Polymerase PurificationI also have the bacteria containing the clone. It appears to produce lots of Taq and is quite stable.The proceedure takes 查看更多>
2017-12-26
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提取DNA时裂解液的配制方法应该是怎样的
用SDS裂解,RNA酶降解,
在过柱,后洗脱
各位大虾,我想请教下,本人试验作香烟烟雾提取物(CSE)对细胞色素C氧化酶(COX)活性的影响,采用ECV304,拟将细胞破碎后用碧云天的BCA蛋白浓度测定试剂盒测定蛋白浓度,用GENMED细胞/组织悬液细胞色素C氧化酶活性测定试剂盒测定COX活性,但是我不知该选用和种方法裂解细胞,请各位多多指导,小妹万分感谢,
不知单纯使用冰浴中超声裂解够了吗?还是说要选用裂解液呢?最主要的就是我不知道该怎么赔这个裂解液,使其COX活性不产生影响
我是提细胞总蛋白的,6cmdish,我现在是用250ul裂解液的量,可是测出来的蛋白浓度比较低(1ug/ul),提细胞前在显微镜下看了细胞长满了,是不是我的裂解液量加的太多了,应该加多少量比较适合?请教。
细胞裂解液的配制123
__蔷衣°24902017-10-03
【1】可以把裂解液用量调整为50-100微升。

【2】加入裂解液后可以加用超声破碎细胞。

【3】提完细胞的器具可以在显微镜下看一下,剩余的细胞还多不多。如果还多,说明细胞提取的不彻底,还要改进方法,争取提取的细胞彻底一些。
(仅供参考)
裂解方法包括化学裂解、酶裂解和机械裂解.化学裂解和酶裂解通常是比较温和的方法,通常会很少使DNA 断裂.这两种方法(包括SDS 和溶菌酶处理等)提取纯化DNA中常用的方法.机械裂解可以更均一的裂解细胞,同化学裂解相比,机械处理具有更高的裂解效率和更低的选择性.机械处理可以更剧烈和全面的裂解细胞,但也会造成DNA 的断裂.
一、机械裂解法主要有以下两中:
1.热休克(Thermal shock),既反复冻溶法,是一种常用的机械裂解方式比,通常由冷冻和解冻两部分组成(freezing and thawing),.原理:由于细胞内冰粒形成和剩余细胞液的盐浓度增高引起溶胀,使细胞结构破碎.冷冻通常在液氮或-20°C冰上进行,解冻可以在37、50、65 或100℃水浴中进热休克比化学裂解温和,但是很有效,有资料表明用热休克和溶菌酶与SDS的方法获得了90%的细胞裂解率.
2.超声波处理(Ultrasonication)既利用超声加热的方法,把细胞破碎.但这种处理会导致DNA 的断裂,所以加热不宜过剧烈,要设定好超声时间和间隙时间,一般超声时间不超过5秒,间隙时间最好大于超声时间,这些都有利于保护酶的活性.bead-beating 也是常用的机械处理方式,有报道指出bead-beating 比热休克和化学裂解的细胞裂解效果更好 虽然DNA产量较高,但通常得到的DNA片段较小.
二、 化学裂解和酶裂解法(在提核酸时联合使用)
主要是裂解液处理法,细胞裂解液的主要目的有以下几种:(1)利用去污剂破坏脂质双分子层,破裂细胞;(2)溶解蛋白;(3)蛋白变性使其稳定;(4)抑制蛋白酶活性.
主要根据不同的目的,裂解液的组成有所不同,主要有提取核酸和蛋白两中.在提取RNA或DNA时,我们主要是要充分裂解细胞,得到更多的核酸;如果我们的目的是蛋白,那要根据蛋白的位置、特性等因素考虑裂解液,在提取蛋白后,再根据实验需要复性蛋白等.以下是细胞裂解中常用试剂和其作用:
50 mM Tris-HCl pH 7.4(缓冲体系),150 mM NaCl(等渗体系),1 mM PMSF (强大的蛋白酶抑制剂),1 mM EDTA(变性剂和稳定剂),5 μg/ml Aprotinin(蛋白酶抑制剂),5 μg/ml Leupeptin(蛋白酶抑制剂),1% Triton x-100(破坏细胞),1% Sodium deoxycholate(中度变性剂和蛋白溶解剂),0.1% SDS(强变性剂和蛋白溶解剂).7M 尿素,2M硫脲(可以提高膜蛋白的融解),蛋白酶K等.
各位大侠:俺在提取细胞总蛋白时,蛋白质提取出像果冻一样的东西,俺的步骤如下:
1细胞用冷PBS洗两遍,离心,去除上清;
2加50~100ul三去污细胞裂解液;
3加PMSF,AP各1ul;
4用100ulTIp头吹打数次;
5置冰上15分钟
612000rpm,15min,4度
7取上清。这时,上清呈黏液状,用枪头吸时会将细胞碎片一起吸出。拉丝度很长,测蛋白浓度显示有,各位,这是怎么回事?做WB会影响结果吗?这种蛋白质在保存过程中会容易降解吗?
有的资料上显示第四步,不是用Tip头吹打,而是将EP管在桌上猛敲击几下,这个方法我也试过,但是结果蛋白浓度很低,没有出现上述现象,这是怎么回事呀?
ripa裂解液对核蛋白的提取好点。加到细胞培养皿里面,摇15分钟,然后刮下来吸出来,是做western的话加Loading buffer 再95°煮10分钟。
  裂解液裂解是一种比较温和的红细胞去除方法,主要用于经酶消化分散的组织细胞的分离纯化,淋巴细胞的分离纯化以及组织细胞蛋白与核酸提取等实验中红细胞的去除。经红细胞裂解液裂解得到的组织细胞中不含红细胞,可进一步用于原代培养、细胞融合、流式细胞分析、核酸与蛋白的分离和提取等。
一、细胞凋亡检测系统和试剂
Caspase-GloTM3/7检测
Apo-ONETM均质Caspase-3/7检测
CaspACETMFITC-VAD-FMK原位标准物
CaspACETM检测系统,比色法
CaspACETM检测系统,荧光法
末端脱氧核苷酸转移酶
DeadEndTM比色法TUNEL系统
DeadEndTM荧光法TUNEL系统
DeathCheckTM检测系统
Caspase抑制物Z-VAD-FMK
Caspase抑制物Ac-DEVD-CHO

二、与细胞凋亡有关的抗体
抗pS473Akt抗体
抗ACTIVE®Caspase-3抗体
抗细胞色素C单克隆抗体
抗PARPp85片段抗体
我想问一下我提出大鼠脑线粒体后提线粒体蛋白的方法:用常规细胞裂解液【7mmol/L尿素(urea)、2mmol/L硫脲(thiourea)、4%CHAPS、10mmol/L硫苏糖醇(DTT)、pharmalyte(载体两性电介质就是IPG的buffer)pH3-10(1:50稀释)】60-100ul,吹打并振荡使蛋白尽量溶解。12000g离心10min。收集上清即为蛋白质提取物。

这样可不可以?

另还有几个问题:1、这样的裂解液裂解线粒体提蛋白可不可以
2、裂解液加多少剂量
3、12000g离心10min和30分钟有没有区别
聚腺苷酸二磷酸核糖转移酶-1[poly(ADP-ribose)polymerase-1,PARP-1]是存在于真核细胞中催化聚ADP核糖化的细胞核酶,其参与的聚ADP核糖化是真核细胞中蛋白质翻译后的重要修饰方式之一。PARP-1在DNA修复和细胞凋亡中发挥至关重要的作用。在凋亡过程中,PARP-1由116kDa被切割成85kDa,催化NAD-依赖的多聚(ADP-核糖)(PAR)往各自质膜以及核蛋白上的聚合。总而言之,PARP在DNA损伤修复与细胞凋亡中发挥着重要作用。
**捷向您推荐美国Trevigen的一款通用PARP分析试剂盒检测试剂盒。该试剂盒是检测凋亡前与凋亡中细胞提取液中PARP活性的理想方案,操作简单,重复性高。其通过检测96孔板上生物素标记的多聚ADP核糖聚合到邻近组蛋白的反应,从而确定已知的或可能的PARP抑制剂。试剂盒中的依托泊苷(Etoposide)是拓扑异构酶Ⅱ抑制剂,在拓扑异构酶Ⅱ切割完DNA后能够稳定该酶。在试剂盒中,依托泊苷作为凋亡诱导的对照参与检测。
通量PARP/凋亡分析试剂盒可广泛应用于1)检测原代、肿瘤等细胞的PARP活性;2)检测凋亡前后的PARP活性;3)利用细胞裂解液筛选PARP抑制剂。
试剂盒特色比色法/化学发光法,无放射性输出。96well,高通量检测。极大地节省了分析时间,提高了使用效率。高敏感性。能够检测到500个细胞中低至0.1mU的PARP。检测范围广。0.1-10mU。样本用量少。仅仅需要10-100ng的提取物。检测时间短。仅需要3h即可完成检测。

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如果要培养,用淋巴细胞分离液。如果只是用于检测,用红细胞裂解液