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| Formulation | 100mMNaPO4,0.1%PEG,pH6.5 |
| Storage | -80°C |
| Purity | >95%bySDS-PAGE |
| ActivityDetermination | Fibrinogenclottingassay |
| ShelfLife(properlystored) | 12months |
Thedegradationpatternofhumanα-thrombintolessactiveformsisillustratedabove.β-thrombinisgeneratedbycleavageoftheintactB-chainattheArg106-Tyr107bondtoyieldtheB1andB2fragments.γ-thrombinisgeneratedbyfurthercleavageoftheβ-thrombinB2-chainattheLys190-Gly191bondtoyieldtheB4andB5fragments.Althoughnotillustrated,theB3fragmentisapotentialintermediatethatisderivedbycleavageoftheintactB-chainattheLys190-Gly191bond,resultinginaproductthatisoftenreferredtoasβ"-thrombin.(TheaminoacidnumberingusedherebeginsattheNH2-terminalendoftheA-chainandcontinuesthroughtheB-chain).
SampleGelInformation:
| Gel | Novex4-12%Bis-Tris |
|---|---|
| Load | HumanBeta&GammaThrombin,1µgperlane |
| Buffer | MES |
| Standard | SeeBluePlus2;Myosin(188kDa),PhosphorylaseB(98kDa),BSA(62kDa),GlutamicDehydrogenase(49kDa),AlcoholDehydrogenase(38kDa),CarbonicAnhydrase(28kDa),MyoglobinRed(17kDa),Lysozyme(14kDa),Aprotinin(6kDa),Insulin,Bchain(3kDa). |
| Note | Othercontaminantsareofthrombinorigin,andmaymakeupto~5%oftheadditionalbandmass. |
Overview:
Alpha-thrombinisahighlyspecificserineproteasegeneratedbyproteolyticactivationofthezymogenprothrombin(1).Purifiedformsofα-thrombinhavebeenshown(2-4)toundergoautolysisuponlongtermstoragetolessactiveforms.Similarinactivationwasobserveduponlimiteddigestionofa-thrombinwithtrypsin(5).Theseproteolyzedformsofα-thrombinhavebeentermedβ-thrombinandγ-thrombin.Humanβ-thrombinisgeneratedbycleavageoftheB-chainattheArg106-Tyr107bond.γ-thrombinisgeneratedbyfurthercleavageoftheβ-thrombinB2-chainattheLys190-Gly191bond.Anotherformofproteolyzedthrombin,termedβ"-thrombinisformedbythesinglecleavageofthrombinatArg-154.γ-thrombinisproducedbyproteolyticcleavageatbothofthesesites(Arg70/73andArg-154)intheB-chain.Thesecleavagescausereleaseofpeptidesthatarenolongercovalentlyattachedtothethrombinmolecule,butremainassociatedthroughionexchangeandgelfiltrationchromatography.TheseproteolyzedformsofthrombinretaintheirABIlitytocleavesmallsyntheticsubstrates(6,7)andsomeproteinsubstratessuchasfactorXIII(8),antithrombinIII(9)andprothrombin(10).Theirabilitytoclotfibrinogen(11),cleavethrombospondin(12)oractivateproteinC(9)havebeenmarkedlydecreased.
Humanβ-thrombinandγ-thrombinarepreparedfrompurifieda-thrombinbylimitedproteolysiswithTPCK-treatedtrypsin,essentiallybythemethodofBraunetal.(5).Theproteolyzedformsofa-thrombinaresuppliedin100mMNaH2PO4,pH6.5bufferandshouldbestoredat-20ºC.PurityisassessedbySDS-PAGEandactivityisassessedusingafibrinogenclottingassay.
Properties:
| Modeofaction | Proteolyzedformsof-thrombinwhichretainactivitytowardsmallsubstrates,factorXIIIandprothrombin,buthavereducedactivitytowardfibrinogen,proteinCactivationandantithrombinIIIbinding. | |||||
|---|---|---|---|---|---|---|
| Molecularweight | 36,700(b-thrombin) 36,700(g-thrombin) 4,000(Achain)* 34,300(Bchain)* 6,000(B1chain)* 10,400(B5chain)* 11,800(B4chain)* *ApparentmolecularweightasdeterminedbySDS-PAGEanalysis | |||||
| Extinctioncoefficient |
| |||||
| Structure | b-thrombin:threechains(A,B1,B2),disulfidelinkbetweentheAandtheB2chains.g-thrombin:fourchains(A,B1,B5,B4)withadisulfidelinkbetweentheApeptideandtheB5peptide. |
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公司简介
蚂蚁淘（www.ebiomall.cn）是中国大陆目前唯一的生物医疗科研用品B2B跨境交易平台，
该平台由多位经验丰富的生物人和IT人负责运营。蚂蚁淘B2B模式是指客户有采购意向后在蚂蚁
淘搜索全球供应信息，找到合适的产品后在蚂蚁淘下单，然后蚂蚁淘的海外买手进行跨境采购、
运输到中国口岸，最后由蚂蚁淘国内团队报关运输给客户...
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2018-12-26
选择材料及预处理 以蛋白质和结构与功能为基础，从分子水平上认识生命现象，已经成为现代生物学发展的主要方向，研究蛋白质，首先要得到高度纯化并具有生物活性的目的物质。蛋白质的制备工作涉及物理、化学和生物等各方面知识，但基本原理不外乎两方面。一是得用混合物中几个组分分配率 查看更多
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2021-07-28
苍术提取物是由西安草根生物工程有限公司代理或销售的草根品牌的试剂，产品来源于西安。西安草根生物工程有限公司是中国最权威的苍术提取物试剂销售服务商之一，在西安等地方销售苍术提取物试剂已经多年。生物在线为您提供众多企业苍术提取物仪器产品及图片，以便挑选到性价比高，合适的苍术提取物产品 查看更多
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北京义翘神州科技有限公司(Sino Biological Inc.)在发布的人 IL22BP / IL22RA2 人细胞裂解液 (阳性对照) (变性)供应信息，浏览与人 IL22BP / IL22RA2 人细胞裂解液 (阳性对照) (变性)相关的产品或在搜索更多与人 IL22BP / IL22RA2 人细胞裂解液 (阳性对照) (变性)相关的内容。 查看更多
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2018-02-10
人脑膜细胞裂解液是由上海中乔新舟生物科技有限公司代理或销售的sciencell品牌的试剂，产品来源于美国。上海中乔新舟生物科技有限公司是中国最权威的人脑膜细胞裂解液试剂销售服务商之一，在上海等地方销售人脑膜细胞裂解液试剂已经多年。生物在线为您提供众多企业人脑膜细胞裂解液仪器产品及图片，以便挑选到性价比高，合适的人脑膜细胞裂解液产品 查看更多
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2021-08-20
北京义翘神州科技有限公司(Sino Biological Inc.)在发布的人 MAG / GMA / Siglec-4 人细胞裂解液 (阳性对照) (变性)供应信息，浏览与人 MAG / GMA / Siglec-4 人细胞裂解液 (阳性对照) (变性)相关的产品或在搜索更多与人 MAG / GMA / Siglec-4 人细胞裂解液 (阳性对照) (变性)相关的内容。 查看更多
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2018-04-24
上海研生实业有限公司所提供的红细胞裂解液质量可靠、规格齐全,上海研生实业有限公司不仅具有精湛的技术水平,更有良好的售后服务和优质的解决方案,欢迎您来电咨询此产品具体参数及价格等详细信息！ 查看更多
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上海甄准生物科技有限公司在发布的爪哇茶提取物供应信息，浏览与爪哇茶提取物相关的产品或在搜索更多与爪哇茶提取物相关的内容。 查看更多
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2018-04-06
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2018-06-20
徐州微科曼得生物工程有限公司在发布的RIPA组织/细胞裂解液（中）供应信息，浏览与RIPA组织/细胞裂解液（中）相关的产品或在搜索更多与RIPA组织/细胞裂解液（中）相关的内容。 查看更多
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2018-12-26
10ml 三去污裂解液配方如下：50 mmol/L Tris-cl (pH 8.0)： 0.07882g 150 mmol/L NaCl： 0.08775g0.2 g/L叠氮钠： 0.002g 1 g/LSDS 0.01g100 mg/L Aprotin 0.001g10 g/L NP-40 0.1g 5 g/L去氧 查看更多
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2018-03-24
浙江圣氏生物科技有限公司在发布的纯天然植物槐花提取物供应信息，浏览与纯天然植物槐花提取物相关的产品或在搜索更多与纯天然植物槐花提取物相关的内容。 查看更多
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2018-04-18
南京道斯夫生物科技有限公司在发布的菠菜提取物供应信息，浏览与菠菜提取物相关的产品或在搜索更多与菠菜提取物相关的内容。 查看更多
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常见问题
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【求助】急, !!!请教下细胞裂解的方法 蛋白质和糖学技术讨论版...123
小时候的梦想家2021-07-26
各位大虾，我想请教下，本人试验作香烟烟雾提取物（CSE）对细胞色素C氧化酶（COX）活性的影响，采用ECV304，拟将细胞破碎后用碧云天的BCA蛋白浓度测定试剂盒测定蛋白浓度，用GENMED细胞/组织悬液细胞色素C氧化酶活性测定试剂盒测定COX活性，但是我不知该选用和种方法裂解细胞，请各位多多指导，小妹万分感谢，
不知单纯使用冰浴中超声裂解够了吗？还是说要选用裂解液呢？最主要的就是我不知道该怎么赔这个裂解液，使其COX活性不产生影响
不知单纯使用冰浴中超声裂解够了吗？还是说要选用裂解液呢？最主要的就是我不知道该怎么赔这个裂解液，使其COX活性不产生影响
【求助】组织裂解需要加多少裂解液？ 蛋白质和糖学123
zhtwll20052021-07-29
我是提细胞总蛋白的，6cmdish，我现在是用250ul裂解液的量，可是测出来的蛋白浓度比较低（1ug/ul），提细胞前在显微镜下看了细胞长满了，是不是我的裂解液量加的太多了，应该加多少量比较适合？请教。
细胞凋亡PARP研究工具PARP凋亡检测试剂盒_价格厂家供应商_武...123
amyjet2021-07-30
聚腺苷酸二磷酸核糖转移酶-1[poly(ADP-ribose)polymerase-1,PARP-1]是存在于真核细胞中催化聚ADP核糖化的细胞核酶，其参与的聚ADP核糖化是真核细胞中蛋白质翻译后的重要修饰方式之一。PARP-1在DNA修复和细胞凋亡中发挥至关重要的作用。在凋亡过程中，PARP-1由116kDa被切割成85kDa，催化NAD-依赖的多聚（ADP-核糖）（PAR）往各自质膜以及核蛋白上的聚合。总而言之，PARP在DNA损伤修复与细胞凋亡中发挥着重要作用。
**捷向您推荐美国Trevigen的一款通用PARP分析试剂盒检测试剂盒。该试剂盒是检测凋亡前与凋亡中细胞提取液中PARP活性的理想方案，操作简单，重复性高。其通过检测96孔板上生物素标记的多聚ADP核糖聚合到邻近组蛋白的反应，从而确定已知的或可能的PARP抑制剂。试剂盒中的依托泊苷（Etoposide）是拓扑异构酶Ⅱ抑制剂，在拓扑异构酶Ⅱ切割完DNA后能够稳定该酶。在试剂盒中，依托泊苷作为凋亡诱导的对照参与检测。
通量PARP/凋亡分析试剂盒可广泛应用于1）检测原代、肿瘤等细胞的PARP活性；2）检测凋亡前后的PARP活性；3）利用细胞裂解液筛选PARP抑制剂。
试剂盒特色比色法/化学发光法，无放射性输出。96well，高通量检测。极大地节省了分析时间，提高了使用效率。高敏感性。能够检测到500个细胞中低至0.1mU的PARP。检测范围广。0.1-10mU。样本用量少。仅仅需要10-100ng的提取物。检测时间短。仅需要3h即可完成检测。
**捷向您提供一站式的PARP相关实验解决方案，除了高通量PARP/凋亡分析试剂盒，还有PARP体内药理动力学二代分析试剂盒(PDAII)和通用PAPR分析试剂盒外(含组蛋白包被可拆卸板)，以及相关抗体和重组蛋白。
Trevigen是一家快速成长的美国生物技术公司，专注于细胞凋亡、DNA损伤和修复、肿瘤细胞功能与行为等方面研究的肿瘤研究产品和服务。作为Trevigen在中国区域的总代理，**捷与Trevigen一道为中国的科研工作者提供最好、最新的氧化应激、细胞损伤和肿瘤细胞行为研究等领域内的优质产品和技术服务。如果您对上述产品及方案感兴趣，请致电400-6800-868至**捷科技有限公司垂询血管生成研究的相关实验解决方案，或索取最新的产品资料。
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细胞裂解后对细胞表面蛋白有什么影响蚂蚁淘_问答详情_细胞裂解和...123
晗小颜茨爬252021-07-31
细胞癌变后，细胞膜表面的糖蛋白会减少。甲胎蛋白是一种，糖蛋白。这种长蛋白主要来自于胎儿的干细胞，常人体内极少，而且甲胎蛋白一般是用来检测肝癌的。 当肝细胞发生癌变时，恢复了产生这种蛋白质的功能，而且随着病情恶化它在血清中的含量会急剧增加，甲胎蛋白就成了诊断原发性肝癌的一个特异性临床指标，所以要如果说细胞癌变后，产生甲胎蛋白并不是非常的严谨。因为它只是作为肝癌的一个指标罢了。而抗原的表示范围比较大。所以这里是使用的抗原而不是甲胎蛋白。
产品类别细胞凋亡检测试剂盒| 博士德生物BOSTER Biological ...123
nakuta1302021-07-28
基因组DNA提取中细胞裂解液怎么配制_问答详情_细胞裂解和提取物_...123
血刺裁决04K2021-07-27
用SDS裂解，RNA酶降解，在过柱，后洗脱
(推荐)细胞组织裂解(提蛋白)方法123
小小V冣6932017-10-03
蛋白在细胞内，需要把细胞裂解才能提出
红细胞裂解液的作用原理是什么?它为什么不会裂解其他细胞?比如...123
你懂得2p壐2017-10-03
不会
非放射性荧光TRAP法对端粒酶活性的检测与定量123
memory09132021-08-03
一、细胞裂解的准备
(1)1×107细胞重悬,其来源可为新鲜样品或贮存于-80℃1mol冰冻清洗缓冲液中
的无DMSO的样品,冰冻缓冲液包括10mMHEPES(pH7.5),1.5mMMgCl2,10mMKCl,
1mM二硫苏糖醇(DTT),然后离心(16000rpm、4℃、1min)。
(2)重悬细胞团于100ul冰冻裂解缓冲液,其包含10mMTris-HCl(pH7.5),1mMMgCl2,1mMEGTA,0.1mM苯甲基磺酰氟(DMSF),5mMB2巯基乙醇,0.5%CHAPs(Pierce)和10%甘油。
(3)冰育30分,然后在超速离心机中离心30分钟。
(4)去上清,液氮速冻沉淀,裂解细胞于-80℃保存。
二、扩增
(1)在微量管中冻干0.1ug荧光标记的cx反转引物,蜡封(5′CCCTTACCCTTACCC
TTACCCTTA3′)。
(2)于蜡界之上加50ulTRAP反应物,包括Tris-Cl(pH8.3)20mM,1.5mMMgCl2,
63mMKCl,0.005%,TWeen20,1mMEGTA,50mM三磷酸脱氧核苷,0.1ug荧光标记
TS前导引物(5′AATCCGTCGAGCAGAGTT3′),1ugT4基因32蛋白,牛血清白蛋白0.1mg/ml,2UTaqNDA聚合酶(Takara,shyzou)和5ugCHAPs细胞提取液。荧光标记TS引物可由市场购得。扩增前5ug提取物与1ugRNA酶37℃水浴20分钟,为了端粒酶活性的标准化,运用体内端粒酶活性标准(TTAS):TS重叠引物和CX重叠引物(TS:5′AATCCGTCGAGCAGAGTTGTGAATGAGGCCTTC3′及CX:5′CCCTTACCCTTACCCTTACCCTTATAGGCGCTCAATGTA3′)TS(18bp)和CX(24bp)序列为普通型,下划线标出的为成肌素序列(每个15bp)。成肌素CDNA通过这些引物扩
增产生了150bp的产物,它可用与ITAS扩增端粒酶梯度相同的TS引物和CX引物进行
再扩增。每一项测定用25attogram以显现I-TAS,它并不干扰TRAP测量。
(3)置于22℃10分钟,作为TS引物由端粒酶介导的延伸。90℃热灭活反应物90秒。
(4)PCR扩增,条件94℃30S,50℃30S,72℃1.5min;共27循环。
三、分析
(1)制备8%的变性胶(longRanger,ATBiochem)含6M尿素。
(2)加电泳缓冲液(1×TBE)于电泳槽。
(3)上样缓冲液与产物各1ul混合后上样,上样缓冲液含90%甲酰胺和10%蓝葡聚
糖(Bluedertian)。
(4)95℃预发性4分钟,速冷,上样,运用100bp,150bp,200bp大小荧光标记物。
(5)测序
(6)测序结果由FiagmuntManager程序自动分析,每一荧光峰根据大小、高度、面积定
量。因为过量扩增的产物会产生不可信的面积值,一部分PCR产物应在蒸馏水稀释后再分析
(1)1×107细胞重悬,其来源可为新鲜样品或贮存于-80℃1mol冰冻清洗缓冲液中
的无DMSO的样品,冰冻缓冲液包括10mMHEPES(pH7.5),1.5mMMgCl2,10mMKCl,
1mM二硫苏糖醇(DTT),然后离心(16000rpm、4℃、1min)。
(2)重悬细胞团于100ul冰冻裂解缓冲液,其包含10mMTris-HCl(pH7.5),1mMMgCl2,1mMEGTA,0.1mM苯甲基磺酰氟(DMSF),5mMB2巯基乙醇,0.5%CHAPs(Pierce)和10%甘油。
(3)冰育30分,然后在超速离心机中离心30分钟。
(4)去上清,液氮速冻沉淀,裂解细胞于-80℃保存。
二、扩增
(1)在微量管中冻干0.1ug荧光标记的cx反转引物,蜡封(5′CCCTTACCCTTACCC
TTACCCTTA3′)。
(2)于蜡界之上加50ulTRAP反应物,包括Tris-Cl(pH8.3)20mM,1.5mMMgCl2,
63mMKCl,0.005%,TWeen20,1mMEGTA,50mM三磷酸脱氧核苷,0.1ug荧光标记
TS前导引物(5′AATCCGTCGAGCAGAGTT3′),1ugT4基因32蛋白,牛血清白蛋白0.1mg/ml,2UTaqNDA聚合酶(Takara,shyzou)和5ugCHAPs细胞提取液。荧光标记TS引物可由市场购得。扩增前5ug提取物与1ugRNA酶37℃水浴20分钟,为了端粒酶活性的标准化,运用体内端粒酶活性标准(TTAS):TS重叠引物和CX重叠引物(TS:5′AATCCGTCGAGCAGAGTTGTGAATGAGGCCTTC3′及CX:5′CCCTTACCCTTACCCTTACCCTTATAGGCGCTCAATGTA3′)TS(18bp)和CX(24bp)序列为普通型,下划线标出的为成肌素序列(每个15bp)。成肌素CDNA通过这些引物扩
增产生了150bp的产物,它可用与ITAS扩增端粒酶梯度相同的TS引物和CX引物进行
再扩增。每一项测定用25attogram以显现I-TAS,它并不干扰TRAP测量。
(3)置于22℃10分钟,作为TS引物由端粒酶介导的延伸。90℃热灭活反应物90秒。
(4)PCR扩增,条件94℃30S,50℃30S,72℃1.5min;共27循环。
三、分析
(1)制备8%的变性胶(longRanger,ATBiochem)含6M尿素。
(2)加电泳缓冲液(1×TBE)于电泳槽。
(3)上样缓冲液与产物各1ul混合后上样,上样缓冲液含90%甲酰胺和10%蓝葡聚
糖(Bluedertian)。
(4)95℃预发性4分钟,速冷,上样,运用100bp,150bp,200bp大小荧光标记物。
(5)测序
(6)测序结果由FiagmuntManager程序自动分析,每一荧光峰根据大小、高度、面积定
量。因为过量扩增的产物会产生不可信的面积值,一部分PCR产物应在蒸馏水稀释后再分析
细胞总蛋白提取方法123
coollanlan2021-08-04
最近将长满的100毫升的细胞培养瓶的细胞进行总蛋白的提取，每次只加了100微升的三去污溶液，最后测的溶度还是比较低，5微升里最多只有十几微克的总蛋白。不知道大家的经验是什么？如何提高细胞总蛋白的浓度？
有哪位知道哪种细胞裂解液比较好,需要保持细胞内蛋白活性 实验...123
1伤蔡112017-10-03
ripa裂解液对核蛋白的提取好点。加到细胞培养皿里面，摇15分钟，然后刮下来吸出来，是做western的话加Loading buffer 再95°煮10分钟。
裂解液裂解是一种比较温和的红细胞去除方法,主要用于经酶消化分散的组织细胞的分离纯化，淋巴细胞的分离纯化以及组织细胞蛋白与核酸提取等实验中红细胞的去除。经红细胞裂解液裂解得到的组织细胞中不含红细胞，可进一步用于原代培养、细胞融合、流式细胞分析、核酸与蛋白的分离和提取等。
裂解液裂解是一种比较温和的红细胞去除方法,主要用于经酶消化分散的组织细胞的分离纯化，淋巴细胞的分离纯化以及组织细胞蛋白与核酸提取等实验中红细胞的去除。经红细胞裂解液裂解得到的组织细胞中不含红细胞，可进一步用于原代培养、细胞融合、流式细胞分析、核酸与蛋白的分离和提取等。
RNA提取时的一些常见问题分析 实验方法123
niupiye32004-11-07
请教各位高手一下，我收集细胞后，因为不能马上做实验，就把细胞加了Trizol保存在－８０度，我想请教一下，是先在室温放５分钟后再冻存还是直接放置于－８０度，用时再取出，放置室温５分钟（说明书上说加了Ｔrizol后一定要置于室温５分钟）．很菜的问题，请各位不要见笑．谢谢！
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