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通过沉淀/离心纯化λ噬菌体颗粒实验

来自 : 蚂蚁淘
实验方法原理如果对噬菌体颗粒进行纯化的目的,是为了获得随后亚克隆所需的外派 DNA 片段或制备噬菌体两臂,那么就可用离心来代替 CsCl 分级梯度和平衡梯度,通过离心将噬菌体颗粒沉淀于离心管底。用这种方法获得的噬菌体的纯度不及平衡梯度离心或甘油梯度离心所获得的,但它们完全能满足于 DNA 的提取。
实验材料
试剂、试剂盒
仪器、耗材
实验步骤
一、材料

1. 缓冲液和溶液

SM

2. 离心机和转子

Beckman SW28 转子或相当型号

3. 载体和菌株

λ 噬菌体颗粒悬浮液

二、方法

1. 将噬菌体悬浮液转移至适用于 Beckman SW28 转子(或相当型号)的离心管中。

2. 经 110000 g ( 25000 r/min 于 Beckman SW28 转子中)4℃ 离心 2 h,收集噬菌体颗粒。

3. 小心地倒掉上清。

在离心管底部可见到透明的(glassy)噬菌体颗粒沉淀。

4. 在沉淀中加入 1~2 ml SM,4℃ 放置过夜,最好置于慢慢转动的摇床上。

5. 第二天上午,轻轻地上下吸取溶液,确使所有的噬菌体颗粒已被重悬。

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