Phusion高保真DNA聚合酶中，一个DNA结合域被融合到类热球菌（Pyrococcus）具有校对功能的聚合酶上。由于这项独特的融合技术，PhusionDNA聚合酶合成DNA的速度和准确度使以往任何单一酶都难以企及，即使是最复杂的模板，也能准确、快速地完成反应。此外，PhusionDNA聚合酶能够最大限度地容忍各种PCR抑制剂，因此只需要很少的优化步骤就可以进行非常高效的扩增。对于热启动PCR，具有高度特异性和极强聚合能力的Phusion热启动II高保真DNA聚合酶是理想的选择。

       PhusionDNA聚合酶的处理能力*是Pfu的10倍，Taq的2倍。这大大降低了延伸时间，提高了扩增的能力，使其能够在更短的时间里扩增更长的DNA片段（长达20kb）。与传统校正酶相比，PhusionDNA聚合酶用量更少，产量更高。

优点：
■精确：是目前市场上保真度最高的热稳定性聚合酶
■强劲：更高的成功率和更少的优化步骤
■快速：高处理能力缩短反应时间（延伸速度15-30s/kb）
■高产：低酶量、高产量（50微升反应体系只需0.5-1单位酶）
■特异：独特的热启动修饰，实现“零时间”激活，减少了非特异性扩增和引物降解

应用：
■高保真PCR
■快速PCR
■热启动PCR
■长片段扩增（长达20kb）
■高通量PCR

满足高要求PCR需求的超高保真度

      PhusionDNA聚合酶的错配率极低，为高保真PCR建立了新标准。使用改良的lacI方法检测，PhusionDNA聚合酶的错配率比TaqDNA聚合酶低约50倍,比PfuDNA聚合酶低6倍（见下图）。



反应失败率最低

       PhusionDNA聚合酶能够最大限度地容忍各种抑制剂和其它复杂的反应条件。这不但保证把反应的失败率降到最低，而且能够利用非纯化的材料直接进行PCR。在为人源样本和血液样本设计的ThermoScientific直接PCR试剂盒中，PhusionDNA聚合酶是主要成分。


以多种未经DNA提纯的人源样本为模板进行直接PCR（图1）
不同的样品直接置于20μlPCR反应体系中。利用Phusion人源样本直接PCR试剂盒含有的对照引物成功扩增一段237bp的DNA。PCR反应使用的是ThermoScientificUTW反应管和Piko热循环仪。


PhusionDNA聚合酶集超高保真度、快速和强劲的性能于一体（图2）
从Thermussp.基因组文库中随机挑选16个克隆进行扩增。结果显示了PhusionDNA聚合酶的强劲性能和快速。在用PhusionDNA聚合酶扩增时，94%的DNA片段被成功扩增，酶的用量更少，产量也更高。PfuDNA聚合酶的成功率只有56%，TapDNA聚合酶为62%，而且产量明显较少。

高保真快速PCR

       与其他酶相比，PhusionDNA聚合酶在每次与DNA的结合反应中都能够掺入更多的核苷酸。其高处理能力大大缩短了延伸步骤的时间，进而加快了整个反应的进行。使用PhusionFlashHigh-FidelityPCRMasterMix（Phusion快速高保真PCRMasterMix）的反应时间最短，此试剂盒是专门针对快速PCR而研发的产品。由于其结构独特，PhusionDNA聚合酶的效率非常高。在任何PCR反应中，该酶的用量显著低于其他常见的聚合酶。PhusionDNA聚合酶的高速度和高效率使得它能在最短时间内获得大量产物。




用更少的酶——获得更多的产物（图3）
使用3种不同的DNA聚合酶扩增一个长为3.8kb的人β球蛋白基因。使用PhusionDNA聚合酶可成功扩增出此3.8kb的基因组片段，退火和延长步骤仅需1分钟，明显快于其他两种聚合酶。一个单位的PhusionDNA聚合酶所获得的产物高于2.5或5个单位的PfuDNA聚合酶的产量。


既快速又高产的PhusionFlash（图4）
在Piko热循环仪上，三种不同的聚合酶用不同的延伸时间（10-60s）扩增一段1.5kb的人类cathepsinK基因。只有PhusionFlash能够使用10秒和20秒这样极短的延伸时间完成实验。与其他测试的酶相比，它的特异性产物的产量也非常高。

 

1.单酶：DNA聚合酶，缓冲液，DMSO和MgCl2
2.MasterMix：2Xmastermix
3.试剂盒：所有必需的PCR反应成分包括对照模板和引物

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