3.6.2 用T4 RNA 连接酶连接 RNA 分子一用T4 RNA 连接酶连接 RNA 分子
| 实验材料 | T4RNA连接酶供体RNA受体RNA 试剂、试剂盒 | 10XT4RNA连接酶缓冲液无核酸酶的水FEGRNA酶抑制剂
实验步骤 | 一材料与设备 1)10XT4RNA连接酶缓冲液：50mmol/LTris(pH7,8)，l0mmol/LMgCl2，5mmol/LDTT,1mmol/LATP 2)无核酸酶的水 3)FEG(polyethyleneglycol)40% 4)RNA酶抑制剂 5)T4RNA连接酶 6)供体（donor)RNA 7)受体（acceptor)RNA (二）操作方法 1)进行RNA与RNA分子连接的反应体系如下： 供体(donor)RNA 100-500ng 受体(acceptor)RNA 250ng 10XT4RNA连接酶缓冲液 4ul RNasin核酸酶抑制剂(40U/ul) 1ul PEG,40% 20ul T4RNA连接酶(9-12U/u1) 1ul 补无核酸酶的水至终体积为 4u1 2)37℃孵育30min，或16℃反应过夜. 3)纯化回收，一20℃保存。 注意事项 | 免责声明 本文仅代表作者个人观点，与本网无关。其创作性以及文中陈述文字和内容未经本站证实，对本文以及其中全部或者部分内容、文字的真实性、完整性、及时性本站不做任何保证或承诺，请读者仅作参考，并请自行核实相关内容。
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发布于 ： 2018-08-05
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