3.6.2 用T4 RNA 连接酶连接 RNA 分子一用T4 RNA 连接酶连接 RNA 分子
实验材料 | T4RNA连接酶供体RNA受体RNA 试剂、试剂盒 | 10XT4RNA连接酶缓冲液无核酸酶的水FEGRNA酶抑制剂 实验步骤 | 一材料与设备 1)10XT4RNA连接酶缓冲液:50mmol/LTris(pH7,8),l0mmol/LMgCl2,5mmol/LDTT,1mmol/LATP 2)无核酸酶的水 3)FEG(polyethyleneglycol)40% 4)RNA酶抑制剂 5)T4RNA连接酶 6)供体(donor)RNA 7)受体(acceptor)RNA (二)操作方法 1)进行RNA与RNA分子连接的反应体系如下: 供体(donor)RNA 100-500ng 受体(acceptor)RNA 250ng 10XT4RNA连接酶缓冲液 4ul RNasin核酸酶抑制剂(40U/ul) 1ul PEG,40% 20ul T4RNA连接酶(9-12U/u1) 1ul 补无核酸酶的水至终体积为 4u1 2)37℃孵育30min,或16℃反应过夜. 3)纯化回收,一20℃保存。 注意事项 | |
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发布于 : 2018-08-05
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