| 货号： | M001 |
| 供应商： | 近岸 |
| 数量： | 大量 |
| 规格： | 28000U |
| |||||||||||
|
| ||||||
·T4DNA连接酶说明
T4DNA连接酶常用于催化双链DNA平末端或互补粘性末端之间的连接反应，也能催化双链RNA5’-磷酸末端和3’-羟基末端间的连接。还可以修复双链DNA、RNA或DNA/RNA杂交双链中的单链切口。以上反应均需消耗ATP。
·T4DNA连接酶用途
DNA片段和载体DNA的连接。（参见欣百诺实验方案）。
DNA片段和Linker或AdaptorDNA的连接。
·产品特点
随T4DNA连接酶附带10×T4DNALigationBuffer及独特配方的2XQuickLigationBuffer提供给您更多的选择：而使用10×T4DNALigationBuffer，16℃过夜连接可获得最高的连接效率；使用快连buffer在室温(25℃)下，仅需5分钟即可完成粘性末端或平滑末端DNA片段的连接反应。
·质量保证
本T4DNA连接酶经多次柱纯化，SDS-PAGE胶检测仅可见清晰单一的目的条带；PCR方法检测无大肠杆菌DNA残留，无核酸内、外切酶污染。
·使用建议
粘末端的连接反应:插入片段和载体的摩尔浓度比特别重要，此比例在2-6之间最好，低于2:1就会导致较低的连接效率，高于6:1则会导致多个插入。摩尔比请按载体与插入片段DNA浓度及分子大小来计算。
平滑末端的连接反应：平滑末端的连接反应与突出末端相比反应较慢(其Km值约为突出末端的100倍)。进行平滑末端的连接反应时，可提高DNA浓度，将使用酶量增加到突出末端量的2～5倍左右。
向粘粒或噬菌体进行连接反应：可使载体和插入DNA的摩尔比调整为1:1，同时增大DNA浓度以便取得良好效果。(0.05-0.1μg／ul以上)
反应温度：该酶的最适温度为37℃，由于热稳定性较差，因此长时间反应时通常需在16℃下进行。若反应1-2小时左右的话也可在室温下进行反应。
抑制剂：T4DNA连接酶要求Mg2+，因此螯合Mg2+的EDTA的存在会阻碍反应。将溶解于含有高浓度EDTA缓冲液中的DNA准备作为样品使用时，最好先用灭菌蒸馏水或TE缓冲液进行置换。
·快速连接步骤
1）取50ng载体和3倍摩尔量的插入片段，用双蒸水调整总体积为10μl。
2）加入10μl2×QuickLigationBuffer，混匀。
3）加入0.5-1μlT4DNA连接酶，充分但轻柔混匀（切勿剧烈震荡，可能导致酶部分失活）。
4）稍事离心，置于室温(25℃)作用5分钟。
5）冰上放置，转化（如不立即进行转化实验请冻存于-20℃）。
·其他说明
详细内容请参考说明书
