OptimizePCRreactionsthatusedifferentenzymesthantheFailSafe™System(e.g.Taq,Pfu,andTth).
- Fast,simpleoptimization
- ExtremelyhighsensitivityandspecificityusingthePCREnhancerTechnology
- MasterAmpPCRPreMixescontainallcomponentsneededforsuccessfulPCR
- GeneratesPCRproductssuitableforbothTAcloningandblunt-endcloning
- UsefortheoptimizationofPCRreactionsusingavarietyofdifferentenzymesincludingTaq,Pfu,Tth,Tflpolymerases
Applications
Forrapid,dependableoptimizationofPCR,weencourageyoutotrytheFailSafe™PCRSystemtoobtainthebestPCRresultswithanytemplateupto~20kb.However,ifyouprefertouseanotherenzyme,EpicentrealsohastwoMasterAmp™PCROptimizationKitsthatwillhelpyoutoobtainthebestpossIBLePCRresultswiththermostableenzymesfrequentlyusedinPCR,suchasTaq,Pfu,Tth,TflDNApolymerases.TheseMasterAmpPCROptimizationKitscontainaseriesof12MasterAmpPCR2XPreMixesthathavebeenmeticulouslytestedandrepresentacompleterangeofPCRconditionsfrequentlyencountered.EachMasterAmp2XPreMixcontainsallcomponentsneededforPCRexceptfortheprimers,thetemplate,andthePCRenzyme. First,usetheMasterAmp™PCROptimizationKit(Cat.No.MO7201)toperformPCRwithyourtemplate,primers,andeachofthe12MasterAmpPreMixes.SelectthePreMixthatgivesoptimalresults.Then,usethesameMasterAmpPCRPreMixtoobtainreliable,consistentPCRusngthesameDNAtarget/primerset. | STEP1.FindtheoptimalMasterAmpPCRPreMix.DoPCRwithyourtemplate,primersandPCRenzymeinthe12PreMixes. | |
A.A75%-GC-richApoEgeneregionwasamplifiedintotalhumangenomicDNAusingPreMixesA-L.MasterAmpPCRPreMixKproducedoptimalresultsinStep1. | ||
STEP2.UsethesameMasterAmpPCRPreMixtoobtainreliable,consistentPCRofthesamesequence. | ||
B.SubsequentPCRoftheApoEgenewiththesameprimerpairandMasterAmp™PreMixKgaveconsistentresults.SubsequentPCRresultsareconsistentandreliableusingtheoptimalPreMixinStep1. |
MasterAmpPCROptimizationKits;MasterAmpTaqDNAPolymerase;MasterAmpTflDNAPolymerase.Purchaseofthisproductincludesanimmunityfromsuitunderpatentsspecifiedintheproductinserttouseonlytheamountpurchasedforthepurchaser'sowninternalresearch.Nootherpatentrights(suchas5´NucleaseProcesspatentrights)areconveyedexpressly,byimplication,orbyestoppel.FurtherinformationonpurchasinglicensesmaybeobtainedbycontactingtheDirectorofLicensing,AppliedBiosystems,850LincolnCentreDrive,FosterCity,California94404,USA.
Ep
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荧光定量PCR较普通PCR不同的一点就是可以实时检测PCR扩增产物,从而可进行绝对定量或者相对定量。
有大神做过人外周血全血miRNA的提取及后续PCR实验的吗?目前课题实验遇到瓶颈,求助大神!!!是否miRNA的PCR验证在全血做不出?必须要用血浆或者血清?目前血浆、血清也有部分样本。。。。有大神指条明路吗?
跑到还有半小时的时候,跳出一个对话框:“analysiscannotproceed:notenoughsamplesdefined”,最后做出来的结果有扩增曲线但是没有熔解曲线,请各位大神帮忙解释一下。
如果要测量细胞表面2个受体的比率,最好用流式细胞仪来测量
另外还有几个问题。就是跑出来的结果RFU居然有负值,这是怎么回事呢?几乎在0附近,但是在溶解曲线求导前的那个曲线。RFU又是从2400+开始下降的,这是为什么呢?
一般有ROX Reference Dye和ROX Reference Dye II两种,针对不同的PCR仪.一般ABI PRISM 7000/7700/7900HT和7300 Real-Time PCR System使用ROX Reference Dye,而7500 Real-Time PCR System和7500 Fast Real-Time PCR System使用ROX Reference Dye II.其它牌子如Thermal Cycler Dice Real Time System、LightCycler 等Real Time PCR扩增仪时不必使用.
荧光定量PCR较普通PCR不同的一点就是可以实时检测PCR扩增产物,从而可进行绝对定量或者相对定量。
请教园友:
一般做mRNA表达的时候,需要注意提取的RNA中是否有DNA污染,或者通过设计跨内含子的引物来解决。那么,检测MmiRNA的时候,需要注意RNA中DNA污染的问题么?
一般说来,应选用口碑较好的经过大量客户实验验证的荧光定量PCR试剂盒,因为只有选对了试剂盒才能够做成漂亮的实验结果来,特别是对于一些珍贵的样品更不能因为节约一些蝇头小利而糟蹋了样品本身。OneShineSybrGreenpreMix试剂盒在研发之初就考虑到了一般科研环境中方方面面的影响,例如我们就光照强度、光照时间对本产品的影响做了严苛的实验论证,得到1ml本产品盛装于1.5ml离心管中放置在2000Lux光照强度下可以保存12h,超过12h产品性能则会下降。
OneShineSybrGreenpreMix这款试剂盒除了价格适中外,还主要有以下优点:
1、适用于RealTimePCR反应,可以快速、准确地对目的基因进行定量检测。
2、在2×OneShineSybrGreenpreMix中,预先混有SybrGreen,PCR体系配制时只需入模板、引物、ddH2O即可,操作方便快捷。
3、含有更耐高温并持续稳定的DNAPolymerase,可以维持更多的循环数,提供了选择循环数更大的空间。更大的Ct值选择范围就意味着可以支持微量目的基因检测,检测范围fM-nM。
4、反应的Buffer更适合,使反应的基线更水平,无荧光污染信号。使线性期更陡峭,避免了Ct值的无效浮动。使平台期更平直。也确保了引物与模板能够更特异地结合。
5、SybrGreen更耐高温更足量,确保只要扩增反应在进行,目的DNA双链在增加,就有线性强度的荧光产生。
6、dNTPs更足量,确保反应有更高的平台期荧光信号。
7、Mg2+浓度更适合,确保线性期有爆发式的目的DNA片段合成,提高了线性期反应体系的扩增系数和线性期的长度。
8、更高的仪器适配性,SybrGreen染料可以被各大主流仪器的激发光所激发,产生明亮的荧光信号,有利于仪器对信号的捕捉和处理。
我们的产品与市面上目前常见的一种产品相比较有如下区别:
A公司的产品没有熔解温度,或者熔解温度太高。但是A公司的产品Ct值出现略早,这是因为A公司使用了一种小分子量的DNA聚合酶,这种酶与模板和引物的结合较快和较松散,但是扩增的效率和扩增的特异性就不能保证了,类似于温水煮青蛙不温不火的;这种酶还有一个弱点就是不耐冻融。我们使用的是Taq酶,是一种分子量较大的DNA聚合酶,这种酶与模板和引物结合比较慢,但是慢工出细活,这种酶的特异性较好,一旦激活便呈现爆发式的扩增,类似于不鸣则已一鸣惊人。我们产品熔解温度是A公司不可比拟的,线性范围和斜率也是A公司不可比拟的。详见下图:
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