Description: | QuickStep™2 PCR Purification Systems offer a fast and simple method to highly purify your PCR products. |
Order #: | 89815 |
Unit Size: | 10 Plates |
Supplier: | Edge BioSystems, Inc. |
restrictions: | Only available in Germany and selected European countries. |
shipping: | See Manual |
storage: | See Manual |
Product Subcategory: | PCR Purification |
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MoBiTecGmbH是一家私人控股公司,由StephanDiekmann教授于1987年创立。与Max-Planck学会的密切关系以及德国领先的研究中心之一哥廷根的所在地促进了与某些研究中心的密切合作。德国最具创造力的科学家。此外,MoBiTec一直与欧洲和北美的科学家广泛合作,包括法国巴斯德研究所和荷兰Vrije大学的科学家。通过将许多研究人员的精彩创意商业化,MoBiTec能够提供一系列独特的高质量产品和简化的协议,使实验室生活更轻松,并为实际研究留出更多时间。MoBiTec的产品包括e。G。用于体内检测蛋白质-蛋白质或DNA-蛋白质相互作用的双杂交系统,用于筛选特定肽配体的噬菌粒展示系统和选择具有特异性结合特性的新蛋白质,方便的LamBDaPS基因组文库用于克隆的多功能DNA载体,表达和分析靶基因,有效表达和纯化重组蛋白的试剂盒,细胞转染试剂和细胞培养工具,固定化和可溶性酶,许多用于基因组学和蛋白质组学研究的产品(例如用于PCR,核酸和蛋白质纯化和分析),众多抗体,细胞因子,生长因子和重组蛋白,优质荧光试剂和试剂盒(如蛋白标记试剂盒,标记抗体,细胞染色试剂,柱和凝胶电泳附件)。与其自有产品线并行,MoBiTec分销德国多家国际公司的产品,包括荧光探针和研究化学品(AnaSpec,TEFLabs),量子点,各种DNA纯化试剂盒和DNA聚合酶(EdgeBio),诊断工具(ZJBioTech)),凝胶电泳配件(Amresco,ClareChemical),糖生物学产品(DextraLaboratories,Sumitomo),细胞转染试剂(Mirus)以及抗体,蛋白质,底物,精细化学品和分子和细胞生物学试剂盒 -特别是病毒学,免疫学,神经生物学,细胞凋亡,信号转导,细胞增殖,细胞毒性和癌症研究(MBLI,AGScientific,Amresco,AdarBiotech,AnaSpec,Echelon)。MoBiTec提供全面的服务,从清晰完整的产品文档开始,为客户提供个性化的建议和技术服务。MoBiTec产品通过MoBiTec的总部在德国分销,在其他国家由分销商分销。此外,MoBiTec不断寻求新产品和可销售的许可技术,因此对科学合作非常感兴趣,以开发创新的产品理念。
MoBiTec拥有来自欧洲和北美的研究人员,包括法国的Pasteur研究中心和荷兰的Vrije大学的科学家。MoBiTec公司能提供独一无二的高质量产品,从而简化实验设计,而留出更多更宝贵的时间用于实际的研究。产品包括:双杂交和单杂交系统——体内蛋白-蛋白和DNA-蛋白关系,噬菌体展示系统——筛选特殊的多肽配体和选择具有特异性结合特性的新的蛋白质,LamdaPS基因文库,用于克隆的多功能DNA载体,靶基因的表达与分析,重组蛋白质高效表达和纯化试剂盒,细胞转染试剂和细胞培养工具,各种固体和溶解状态的酶,基因组学和蛋白组学研究产品(PCR,核酸,蛋白质纯化分析),各种抗体、细胞因子、生长因子、重组蛋白质,高级荧光试剂和试剂盒(蛋白质标记试剂盒,标记抗体,细胞染色试剂,钙指示器),亲和层析仪,凝胶分析工具——凝胶柱和凝胶电泳附件。
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荧光定量PCR数据如下表,想通过GraphPadPrism5软件构建柱状图,但不知道是将2-△△Ct数据导入GraphPadPrism5软件,还是将Mean和SD导入GraphPadPrism5软件中。请大神赐教。另外Mean和SD是求的△△Ct的还是2-△△Ct的?
半定量反转录-聚合酶链反应(semi-quantitative reverse transcription and polymerase Chain reaction ,SqRT-PCR)是近年来常用的一种简捷、特异的定量RNA测定方法,通过mRNA反转录成cDNA,再进行PCR扩增,并测定PCR产物的数量,可以推测样品中特异mRNA的相对数量。
定量RT-PCR(quantitative reverse transcription and polymerase Chain reaction ,qRT-PCR)是在用一步法或两步法,在PCR反应体系中加入荧光基团,利用荧光信号积累实时监测整个PCR进程,最后通过标准曲线对未知模板进行定量分析的方法。
半定量RT-PCR需要跑电泳,根据条带亮度的强弱来判断模板拷贝数的高低或者是表达量的高低,而定量RT-PCR则无需电泳可以实时监测整个PCR的全程并且由给出的Ct值及Standard Curve来判断gene拷贝数的高低。
有大神做过人外周血全血miRNA的提取及后续PCR实验的吗?目前课题实验遇到瓶颈,求助大神!!!是否miRNA的PCR验证在全血做不出?必须要用血浆或者血清?目前血浆、血清也有部分样本。。。。有大神指条明路吗?
另外还有几个问题。就是跑出来的结果RFU居然有负值,这是怎么回事呢?几乎在0附近,但是在溶解曲线求导前的那个曲线。RFU又是从2400+开始下降的,这是为什么呢?
一般说来,应选用口碑较好的经过大量客户实验验证的荧光定量PCR试剂盒,因为只有选对了试剂盒才能够做成漂亮的实验结果来,特别是对于一些珍贵的样品更不能因为节约一些蝇头小利而糟蹋了样品本身。OneShineSybrGreenpreMix试剂盒在研发之初就考虑到了一般科研环境中方方面面的影响,例如我们就光照强度、光照时间对本产品的影响做了严苛的实验论证,得到1ml本产品盛装于1.5ml离心管中放置在2000Lux光照强度下可以保存12h,超过12h产品性能则会下降。
OneShineSybrGreenpreMix这款试剂盒除了价格适中外,还主要有以下优点:
1、适用于RealTimePCR反应,可以快速、准确地对目的基因进行定量检测。
2、在2×OneShineSybrGreenpreMix中,预先混有SybrGreen,PCR体系配制时只需入模板、引物、ddH2O即可,操作方便快捷。
3、含有更耐高温并持续稳定的DNAPolymerase,可以维持更多的循环数,提供了选择循环数更大的空间。更大的Ct值选择范围就意味着可以支持微量目的基因检测,检测范围fM-nM。
4、反应的Buffer更适合,使反应的基线更水平,无荧光污染信号。使线性期更陡峭,避免了Ct值的无效浮动。使平台期更平直。也确保了引物与模板能够更特异地结合。
5、SybrGreen更耐高温更足量,确保只要扩增反应在进行,目的DNA双链在增加,就有线性强度的荧光产生。
6、dNTPs更足量,确保反应有更高的平台期荧光信号。
7、Mg2+浓度更适合,确保线性期有爆发式的目的DNA片段合成,提高了线性期反应体系的扩增系数和线性期的长度。
8、更高的仪器适配性,SybrGreen染料可以被各大主流仪器的激发光所激发,产生明亮的荧光信号,有利于仪器对信号的捕捉和处理。
我们的产品与市面上目前常见的一种产品相比较有如下区别:
A公司的产品没有熔解温度,或者熔解温度太高。但是A公司的产品Ct值出现略早,这是因为A公司使用了一种小分子量的DNA聚合酶,这种酶与模板和引物的结合较快和较松散,但是扩增的效率和扩增的特异性就不能保证了,类似于温水煮青蛙不温不火的;这种酶还有一个弱点就是不耐冻融。我们使用的是Taq酶,是一种分子量较大的DNA聚合酶,这种酶与模板和引物结合比较慢,但是慢工出细活,这种酶的特异性较好,一旦激活便呈现爆发式的扩增,类似于不鸣则已一鸣惊人。我们产品熔解温度是A公司不可比拟的,线性范围和斜率也是A公司不可比拟的。详见下图:
1.模板提取(一般为RNA):Trizol、氯仿、异丙醇、无水乙醇、DEPC处理水
2.模板浓度测定:分光光度计或NanoDrop
3.逆转录:逆转录试剂盒(或者一步法试剂盒),这一步可以用普通PCR做,也可以用水域做。
4.荧光定量PCR试剂:通常有用SYBR Green Mix做的,但是这里建议你用EvaGreen做,灵敏度和平行性都要好于SYBR Green,并且如果你那是ABI或者Stratagene的PCR如果用SYBR Green还需要加一步Rox很麻烦。
5.其他:除了以上的那些还需要离心管、PCR管或板(Axygen反应比较好)、移液枪等,暂时就想到这么多。
跑到还有半小时的时候,跳出一个对话框:“analysiscannotproceed:notenoughsamplesdefined”,最后做出来的结果有扩增曲线但是没有熔解曲线,请各位大神帮忙解释一下。
如果要测量细胞表面2个受体的比率,最好用流式细胞仪来测量
在另外的一组管子中,加入已知拷贝数的DNA同时扩增,每个管子中加入的数量是不同的,但是从最小数目到最大数目的这个范围涵盖了样本中DNA拷贝数。
PCR反应完成后,把已知拷贝数DNA的量和PCR荧光Ct值制成标准曲线,再把待测样本的CT值和该标准曲线比对,就可以得到样本中的起始拷贝数了
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