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【求助】【求助】cDNA文库构建过程中的RNA提取问题
2021-08-05
问题描述:

各位大侠好,我想做有关CDNA文库构建的东西,但是不知道改用何种方法提取mRNA,现在好像流行用trazol提RNA,但是不知道提取出来的RNA质量如何,能不能保证其中的没有剪切之前的mRNA的内含子不被降解?如果不行,那用什么办法好?多谢了。
另外还有,提完RNA后用RNase-freeDNase处理RNA会不会影响RNA的质量?

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vivalk
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提完RNA当然要用DNase去除DNA,不过可能RNA也有一定的损失,不可避免。提取mRNA,首先要获得足够的总RNA,然后用试剂盒纯化获得mRNA,得率大概为总RNA:mRNA为100:1。
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