组分 | 24T | 48T | 96T | 使用方法 | 开封后保存条件 |
A.标准品 | 2000 pg | 2000 pg | 2×2000 pg | 按说明书进行稀释 | -20℃可存放一月 |
B.标准稀释液 | 16 mL | 2×16 mL | 4×16 mL | 即用型 | 4℃可存放一月 |
C.浓缩生物素化抗体（100×） | 30 μL | 60 μL | 2×60 μL | 按说明书进行稀释 （现配现用） | |
D.生物素化抗体稀释液 | 16 mL | 16 mL | 16 mL | 即用型 | |
E.浓缩酶结合物（避光100×） | 30 μL | 60 μL | 2×60 μL | 按说明书进行稀释 （现配现用） | |
F.酶结合物稀释液 | 16 mL | 16 mL | 16 mL | 即用型 | |
G.浓缩洗涤液（20×） | 16 mL | 16 mL | 25mL | 即用型 | |
H.显色剂（避光） | 6 mL | 6 mL | 12mL | 即用型 | |
I.终止液 | 12mL | 12mL | 12mL | 即用型 | 4℃或常温保存 |
J.预包被96孔板 | 8×3 | 8×6 | 8×12 | 即用型 | 密封干燥4℃保存 |
K.封板胶纸 | 1张 | 2张 | 4张 | 即用型 |
注：终止液和显色剂具有腐蚀性，一旦接触到液体，请尽快用大量清水冲洗。产品介绍Human Adiponectin ELISA Kit (Human Adiponectin Enzyme-Linked ImmunoSorbent Assay Kit) ，即人脂联素酶联免疫吸附检测试剂盒，可以定量检测人血清、血浆或细胞培养上清液等样本中的天然和重组 Adiponectin 浓度。脂联素 (Adiponectin) ，又称 30 kD 脂肪细胞因子(Adipocyte Complement-Related Protein，Acrp 30)，adipoQ，脂肪组织特有基因 (Adipose Most Abundant Gene Transcript1，apM 1)、或 28 KD 凝胶结合蛋白 (Gelatin-Binding Protein28，GBP 28)，是由脂肪细胞分泌的一种特异性蛋白，主要参与维持体内葡萄糖-脂质平衡，循环脂联素浓度相对较高，约占血浆总蛋白的 0.01%。脂联素 N 端含有胶原蛋白样结构域，C 端具有球状结构域，其中包含一段与补体因子 C1q极为相似的序列和结构，属于可溶性胶原超家族，与胶原Ⅷ、Χ、补体 C1q 和肿瘤坏死因子 (tumor necrosis factor，TNF)家族具有结构同源性。脂联素可形成三聚体、六聚体和更大分子量的低聚体复合物，复合物的类型不同会影响脂联素的生物活性。在脂肪细胞分化或受到胰岛素刺激时细胞会产生脂联素。脂联素有 AdipoR 1 和 AdipoR 2 两个受体，其中AdipoR 1 在骨骼肌中表达量高，AdipoR 2 则主要在肝组织中表达。将一定剂量的脂联素注入非肥胖无糖尿病的正常小鼠体内，会导致其体内胰岛素非依赖性的葡萄糖水平降低，这表明脂联素可作为胰岛素敏感激素，调节甘油三酯代谢。除了正常脂联素外，血液中还存在一种仅含 C 末端球状结构的短脂联素 (gAdiponectin)，这种脂联素可以使小鼠肌肉和肝脏的重量下降，和游离脂肪酸过氧化效果一样，调节效果明显优于正常脂质素。短脂联素脂质过氧化中的作用可能是通过对甘油三酯代谢相关蛋白的表达和活性调控，如 CD36，acyl CoA oxidase，AMPK 和 PPARγ。肥胖和循环脂质素间有明确的负相关关系，脂联素水平随着体重下降而升高。脂联素水平下降和胰岛素抵抗，胰岛素过多相关，Ⅱ型糖尿病患者体内的循环脂联素水平下降。胰岛素敏感素，抗糖尿病药噻唑霉素能提高胰岛素抵抗患者体内的脂联素水平，脂联素水平增高会有效降低Ⅱ型糖尿病发病风险。核磁共振（光谱）分析表明人肌肉细胞内脂肪含量和脂联素水平负相关，这可能是由于脂联素可诱导脂肪酸过氧化造成的。脂联素还在抗动脉粥样硬化和抗炎症方面起作用，在冠心病患者血浆中脂联素水平会下降。脂联素可通过体外抑制内皮细胞粘附分子的表达，抑制单核细胞的附着。另外，脂联素可负调控粒单系细胞生长和巨噬细胞中TNF-a 的产生。
本试剂盒采用双抗体夹心 ELISA 法检测样品中人Adiponectin 浓度。在人 Adiponectin 单克隆抗体预包被酶标板中加入适度稀释的样品和标准品，其中的 Adiponectin 会与其单抗结合，洗去游离成分；加入生物素化的抗人Adiponectin 抗体，抗人 Adiponectin 抗体与结合在单抗上的人 Adiponectin 结合而形成免疫复合物，洗去游离的成分；加入辣根过氧化物酶标记的亲合素，生物素与亲合素特异性结合，洗去未结合的酶结合物；加入显色剂，若反应孔中有Adiponectin，辣根过氧化物酶会使无色的显色剂出现蓝色；加终止液变为黄色。在 450 nm 下测 OD 值，人 Adiponectin浓度与 OD 450 值之间呈正比，可通过绘制标准曲线计算出样品中人 Adiponectin 浓度。注意事项a.稀释后的标准品不可重复使用，未用完的标准品分装，于-20℃或-80℃冻存，避免反复冻融。b. 浓缩生物素化抗体、浓缩酶结合物稀释前请先离心处理，使管内液体沉入底部。c. 不同批号试剂不可混用。d. 混匀要充分，最好使用微量振荡器（用最低频率进行震荡）。
UE-H6123S/H6123M/H6123L◆没有信号？1.试剂添加顺序错误或试剂配制不正确。重复实验；检查试剂配制方法；复核试验试剂添加流程。2.HRP被叠氮化合物污染。使用新鲜配制的试剂。3.抗体用量不足。检查是否使用了推荐的抗体量；增加抗体用量（浓度）。4.使用了含胎牛血清的缓冲液复溶抗体。检查使用的试剂。5.捕获抗体与板结合较差。使用ELISA板，而非组织培养板；使用不含其他杂蛋白的PBS溶解抗体。6.缓冲液受污染。新鲜配置缓冲液。◆整块板呈现规则蓝色？1.洗板不充分或跳过洗涤步骤未去除残留的非结合过氧化物酶。严格按照说明书洗涤流程操作。2.底物溶液预混太早不新鲜。底物溶液混合后须立即使用。3.封板胶纸或试剂储液槽重复使用导致HRP残留污染。每步均需使用新的封板胶纸或试剂储液槽。4.缓冲液有金属或HRP污染。新鲜配置缓冲液。◆标准曲线差？1.链亲和素-HRP结合物量不足。检查倍性稀释是否正确。2.捕获抗体与板结合较差。使用酶标板，而非组织培养板；使用不含其他杂蛋白的PBS溶解抗体。3.检测抗体量不足。检查稀释度是否正确。4.孵育时间不足。延长底物溶液孵育时间。5.实验操作流程有误。严格按照说明书操作流程。6.标准曲线稀释计算错误。重新计算制作新的标准曲线。
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