大肠杆菌转化实验一CaCl2转化法
| 实验材料 | 大肠杆菌 试剂、试剂盒 | CaCl2氨苄青霉素LB 仪器、耗材 | 离心机分光光度计摇床 实验步骤 | 1. 接种—个单菌落于50mlLB培养液中，于37℃摇床培养过夜（250r/min）。 2. 往一个2L的烧瓶中加入400mlLB培养液，再加入4 ml过夜培养液，于37℃；摇床，培养至OD590为0.375。 3. 将培养液分装到8个50ml预冷无菌的聚丙烯管中，于冰上放置5~10min，然后于4℃，1600g离心7min。 4. 细胞沉淀用10ml冰冷的CaCl2“溶液重悬，于4℃，以1100g离心5min。 5. 细胞沉淀用10ml冰冷的CaCl2溶液重悬，冰上放置30min，于4℃，1100g离心5min。 6. 用2ml 冰冷的CaCl2溶液重悬各管细胞，然后按每管250μl的量分装于预冷的无菌聚丙烯管中，立即冻存于-70℃。 7. 按照以下各步骤用10ngpBR322转化100μl感受态细菌。 8. 将合适体积的转化物涂于含有氨苄青霉素的LB平板上，37℃培养过夜。 9. 将10ng 加入到一个15ml无菌的圆底试管中，并放置冰上。 10. 将盛有感受态细胞菌的管子握在手上使菌液迅速熔化。 11. 立即将100μl感受态细菌加入到管中，轻轻旋动，并放置冰上10min。 12. 将管故入42℃水浴2min进行热休克，然后加入1mlLB培养液于每一支试管中。 13. 于37℃置滚筒式摇床口培养1h。 14. 将几个稀释度菌液涂布于含合适抗生素的平板上，于37℃培养12~16h。 |
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发布于 ： 2021-07-18
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