从脐血来源多能祖细胞（CBMNCs）中分离并培养CD34+细胞实验一从CBMNCs中分离CD34+细胞
| 实验方法原理 | |||||||||||
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| 实验材料 | CB-MNCs 试剂、试剂盒 | 灭菌培养基过柱缓冲液FcR阻断剂CD34微球 仪器、耗材 | 柱子（MS+RS+或LS+VS+)磁珠细胞分离仪尼龙过滤网30μm 实验步骤 | (a)准备过柱缓冲液，用抽真空装置去除气体。 (b)每108个CB-MNCs用终体积300μL缓冲液重悬。 (c)每108个CB-MNCs悬液加100μLFcR阻断剂，抑制CD34微珠非特异性结合或通过Fc受体介导与非靶细胞的结合。 (d)每108个CB-MNCs悬液加100μLCD34微球进行细胞标记，充分混匀后在6〜12℃冰箱放置30min。 (e)加PBSA洗，室温200g离心10min;加适量的缓冲液重选细胞。 (f)根据CB-MNCs的细胞总数选择合适的柱子类型（MS+/RS+或LS+/VS+)，将柱子放人MACS分离仪的磁场中。加人缓冲液润洗柱子（MS+/RS+:50μL;LS+/VS：3mL)。 (g)用30μm的尼龙过滤网过滤细胞，去除细胞团。使用前，用缓冲液湿润柱子。 (h)将细胞悬液加人柱子，使未结合的细胞通过柱子。 (i)用缓冲液将未结合的细胞洗去（MS+/RS+:3×500μL;LS+/VS:3×3mL)。 (j)洗脱结合的细胞。将柱子从分离仪中移出。置于合适的管中。将柱子加满缓冲液（MS+/RS+:1mL;LS+/VS:5mL)。用柱子随带的内塞，加压将结合的细胞冲洗出来。 (k)加PBSA将CD34+细胞洗一遍，室温200g离心l0min。用适当的培养基重悬细胞。 注意事项 | 其他 | |
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发布于 ： 2018-08-06
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