Description
Kit for IP/ Co-IP of Myc-taggedproteins & sample preparation for mass spectrometry (MS)
Specificity Myc-tag sequence motif EQKLISEEDL.Endogenous c-myc is NOT bound.
Applications Identification of Myc-tagged proteins & interacting partners by MS Interactome studies Superior processing of IP samples into clean peptide mixtures Intuitive protocol for reproducible results
Details The iST Myc-Trap Kit enables researchers to process Myc-taggedproteins and their interacting partners for Mass Spectrometry analysis by including the ChromoTek Myc-Trap for immunoprecipitation/Co-IP of Myc-taggedproteins and the PreOmics iST buffers and cartridges required for bottom-up proteomic sample preparation. This robust method yields purified peptides while dramatically reducing contamination and sample loss. Each kit accommodates up to eight samples and includes pull-down reagent for controls.
德国chromotek公司成立于2008年，致力于细胞生物学和蛋白质组学的研发与研究，公司拥有强大的研发团队，有先进的生物制剂，主要主要使命是花费较少的时间和成本，使客户获得得高质量的实验数据。
ChromoTekGmbH开创了一类新的免疫学研究工具，该工具源自细胞生物学和蛋白质组学的单域骆驼抗体。ChromoTek成立于2008年，由UlrichRothbauer周边的一个研究团队从慕尼黑路德维希马克西米利安大学（LMU）分拆而来，现已迅速发展成为著名的创新试剂供应商和大型制药公司值得信赖的服务提供商。我们的管理团队结合了互补的技能和经验，形成了持续增长的基础。 ChromoTek的产品分类： 一、Nano-Trap系列；以产品结合物为标准，包含磁珠系列和琼脂糖珠子系列，还有96板系列；抗体结合物包括GFPTrap，RFPTrap，GSTTrap，Dnmt1-Trap；Mk2-Trap；P53-Trap；Mdm4/HdmX-Trap 二、Booster系列；含GFPboosterRFPbooster； 三、可用于HCA实验的Chromobodies(质粒或细胞系形式)； 四、 高品质抗体（标签蛋白抗体和普通抗体）； 德国ChromoTek公司成立于2008年，致力于细胞生物学和蛋白质组学的研发与研究。产品包括单克隆抗体、重组单域抗体、荧光抗体、GFP或RFP连接蛋白等。 ChromoTek有限公司先驱来自单个域骆驼抗体的免疫学研究工具，为细胞生物学和蛋白质组学研究开辟了新的一类。ChromoTek成立于2008年，作为一个分拆上市的路德维希 - 马克西米利安慕尼黑大学（LMU）的一个研究小组围绕乌尔里希Rothbauer，已迅速发展成为一个**的创新试剂供应商，以及作为一个值得信赖的服务提供商，为大型制药公司。我们的管理团队结合互补的技能和经验，形成持续增长的趋势。我们的使命是更好发展，并促进我们的客户在世界各地的研究开发和商业化。正在开发一系列的产品和服务，我们的目标是成为*被认可的在蛋白质组学和活细胞成像领域的***。
ChromoTek
蚂蚁淘生物科技有限公司是德国ChromoTek公司的中国合作伙伴和签约总代理商
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不知道发在这里合适不，实在是求助无门啊！版主手下留情。
百泰派克公司采用Thermo Fisher的Q ExactiveHF质谱平台，Orbitrap Fusion质谱平台，Orbitrap Fusion Lumos质谱平台结合Nano-LC，推出基于iTRAQ的定量蛋白组分析服务技术包裹，您只需要将您的实验目的告诉我们并将您的蛋白寄给我们，我们会负责项目后续所有事宜，包括蛋白酶切、肽段标价、肽段分离、质谱分析、质谱原始数据分析、生物信息学分析。
一、探针DNA标记方法
步骤 ：
1．10ng~3ugDNA每管，双蒸水定量至总体积15ul
2．沸水水浴10分钟后迅速冰浴
3．加入 5号试剂 2ul ， 6号试剂 2ul ，7号试剂 1ul
4．37度1小时~20小时
5．中止反应 加2ul 0.2M EDTA (pH 8.0) 和/或 65度 水浴 10分钟
二、标记效率检测
（一） 试剂配置
Solution Composition Preparation
Washing buffer 0.1 M Maleic acid, 0.15 M NaCl; pH 7.5 (20° C); 0.3% (v/v) Tween 20
Maleic acid buffer 0.1 M Maleic acid, 0.15 M NaCl; adjustwith NaOH (solid) to pH 7.5 (20° C)
Detection buffer 0.1 M Tris-HCl, 0.1 M NaCl, pH 9.5 (20° C)
TE-buffer 10 mM Tris-HCl, 1 mM EDTA, pH 8.0
Blocking stock solution Dissolve Blocking reagent (bottle 10) 10% (w/v) in Maleic
(10 × conc.) acid buffer underconstantly stirring on a heating block(65°C) or heat in a microwave oven,autoclave. The solution remains opaque
Blocking solution Prepare a 1 × working solution by dilutingthe 10 × Blocking solution 1:10in Maleic acid buffer.
Antibody solution Centrifuge Anti-Digoxigenin-AP(vial 8) for 5 min at 10 000 rpm in theoriginal vial prior to each use, and pipet the necessary amount carefully from thesurface. Dilute Anti-
Digoxigenin-AP 1: 5 000 (150 mU/ml) in Blocking solution.
Colorsubstrate Add 40 _l of NBT/BCIP (vial 9) to 2 ml of Detection buffer.
solution Note: Store protected from light!
（二）对照的标记DNA（4号试剂）系列稀释
（三）步骤
1、取以上制备的管2~9各1ul，以及自己标记的探针1ul，点到一小片尼龙膜
2、通过紫外线或者120度半小时使核酸交连到膜上
3、膜置塑料盒中加Maleic acid buffer 20ml ，15~25度轻摇孵育2分钟
4、10ml Blocking solution 孵育30分钟
5、10ml Antibody solution 孵育30分钟
6、10ml Washing buffer 洗2次，每次15分钟
7、10ml Detection buffer中平衡2~5分钟
8、膜在2ml新鲜配制的 Colorsubstrate solution 中避光孵育。显色期间避免摇动
9、中止反应 用TE-buffer或者双蒸水洗5分钟
蛋白酶K预处理
三、样品检测与杂交
（一） 步骤
1、 稀释供试品及阳性对照DNA，点膜
2、 通过紫外线或者120度半小时使核酸交连到膜上
3、 将标记好的探针稀释到约25ng/ml, 煮沸5分钟后迅速冰浴
4、膜放入预热好的预杂交液（3.5ml/100cm2）中，充分混匀，避免起泡
5、倒掉预杂交液，加入杂交液及已变性的探针。杂交温度下至少孵育6小时
四、洗膜
1、2 × SSC, 0.1% SDS ， 15-25° C，洗膜2次，每次5分钟。
2、0.5× SSC, 0.1% SDS ，预热至65~68° C，洗膜2次，每次5分钟
五、结果检测
（一） 试剂配制
Solution Composition Preparation
Washing buffer 0.1 M Maleic acid, 0.15 M NaCl; pH 7.5 (20° C); 0.3% (v/v) Tween 20
Maleic acid buffer 0.1 M Maleic acid, 0.15 M NaCl; adjustwith NaOH (solid) to pH 7.5 (20° C)
Detection buffer 0.1 M Tris-HCl, 0.1 M NaCl, pH 9.5 (20° C)
TE-buffer 10 mM Tris-HCl, 1 mM EDTA, pH 8.0
Blocking stock solution Dissolve Blocking reagent (bottle 10) 10% (w/v) in Maleic
(10 × conc.) acid buffer underconstantly stirring on a heating block(65°C) or heat in a microwave oven,autoclave. The solution remains opaque
Blocking solution Prepare a 1 × working solution by dilutingthe 10 × Blocking solution1:10in Maleic acid buffer.
Antibody solution Centrifuge Anti-Digoxigenin-AP(vial 8) for 5 min at 10 000 rpm in theoriginal vial prior to each use, and pipet the necessary amount carefully from thesurface. Dilute Anti-
Digoxigenin-AP 1: 5 000 (150 mU/ml) in Blocking solution.
Colorsubstrate Add 40 _l of NBT/BCIP (vial 9) to 2 ml of Detection buffer.
solution Note: Store protected from light!
（二） 步骤
1、Washing buffer洗膜1~5分钟
2、100ml Blocking solution 孵育30分钟
3、20ml Antibody solution 孵育30分钟
4、100ml Washing buffer 洗2次，每次15分钟
5、20ml Detection buffer中平衡2~5分钟
6、膜在10ml新鲜配制的 Colorsubstrate solution 中避光孵育。显色期间摇动
7、中止反应 用TE-buffer或者双蒸水50ml洗5分钟展开
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