【求助】请问做VEGFR2蛋白(跨膜蛋白)的WB需要用专门的膜蛋白提取试剂盒吗?
2021-08-07
问题描述:
这个蛋白做了一个多月了,一直没有结果,我是用碧云天RIPA+PMSF提取的,请问这种膜蛋白需要用专门的膜蛋白提取试剂盒提蛋白吗?求指教求指教
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estellalee
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请问有人能帮忙回答一下这个问题吗?
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紫藤花笨笨熊
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请问楼主问题解决了吗?
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China13113
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一般来说提取总蛋白是可以做出VEGFR2条带的,但要注意以下几个方面:1.确保提取出所有蛋白,特别是膜蛋白。如果是细胞样本,不可用胰酶消化处理,因为胰酶会破坏膜蛋白。提取试剂中最好PMSF和广谱蛋白酶抑制剂都加。2.如果单独提取膜蛋白,结果会更好,更有特异性。碧云天和博士德的膜蛋白提取试剂应该都是可以选择使用的。3.如果蛋白提取没问题,WB实验流程没问题(不仅内参出结果,而且VEGFR2蛋白电泳和转膜都成功),但还是不出条带,那就要怀疑是否是一抗的问题了。
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