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Ex/Em(nm) | 571/585 |
MW | N/A |
CAS# | N/A |
Solvent | N/A |
Storage | F/D/L |
Category | SmallMoleculeDetection DiagnosticMolecules |
Related | BiochemicalAssays |
Spectrum | AdvancedSpectrumViewer |
1.Preparestocksolutions:
1.1 Amplite™Redstocksolution(250X):Add40µLofDMSO(ComponentE)intothevialofAmplite™Red(ComponentA)tomakea250Xstocksolution.
Note:TheunusedAmplite™Redstocksolutionshouldbedividedintosingleusealiquots.Storeat-20oCandavoidexposuretolight.
1.2 Cholinestocksolution:Add400µLofddH2OintothevialofCholineStandard(ComponentC)tomake50mMcholinestocksolution.
Note:Theunusedcholinestocksolutionshouldbedividedintosingleusealiquotsandstoredat‑20 oC.
2.Preparecholineassaymixture:
2.1 Add5mLofAssayBuffer(ComponentD)tothebottleofCholineProbe(ComponentB)andmixwell.
2.2 Add20µLofAmplite™Redstocksolution(250X,fromStep1.1)intotheCholineProbebottle(fromStep2.1)tomakethecholineassaymixture.
Note:Thecholineassaymixtureshouldbeusedpromptlyandkeptfromlight.Theassaybackgroundwouldincreasewithlongerstoragetime.
3.Prepareserialdilutionsofcholinestandard(0to30μM):
3.1 Add20μLof50mMcholinestandardstocksolution(fromStep1.2)to980µLAssayBuffer(ComponentD)togenerate1000μMstandardsolution.
Note:Dilutedcholinestandardsolutionisunstable,andshouldbeusedwithin4hours.
3.2 Take30μLof1000μMstandard(fromStep3.1)to970µLAssayBuffer(ComponentD)togenerate30μMcholinestandardsolution,andthenperform1:3serialdilutionstoget10,3,1,0.3,0.1,0.03,and0μMcholinestandard.
3.3 Addcholinestandardsandcholinecontainingtestsamplesintoa96-wellsolidblackmicroplateasdescribedinTables1and2.
Note:Treatthecellsortissuesamplesasdesired.
Table1.Layoutofcholinestandardsandtestsamplesinasolidblack96-wellmicroplate*
BL | BL | TS | TS | …. | …. |
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CS1 | CS1 | …. | …. | …. | …. |
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CS2 | CS2 |
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CS3 | CS3 |
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CS4 | CS4 |
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CS5 | CS5 |
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CS6 | CS6 |
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CS7 | CS7 |
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*Note:CS=CholineStandards;BL=BlankControl;TS=TestSamples
Table2.Reagentcompositionforeachwell*
CholineStandard | BlankControl | TestSample |
Serialdilutions*(50μL) | Assaybuffer:50μL | 50μL |
*Note:Addtheseriallydilutionsofcholinestandardsfrom0.03to30μMintowellsfromCS1toCS7induplicate.
4.Runcholineassay:
4.1 Add50μLofcholineassaymixture(fromStep2.2)toeachwellofthecholinestandard,blankcontrol,andtestsamples(seeStep3.3)tomakethetotalcholineassayvolumeof100µL/well.
Note:Fora384-wellplate,add25μLsampleand25μLofcholineassaymixtureperwell.
4.2 Incubatethereactionatroomtemperaturefor10to30minutes,protectedfromlight.
4.3 MonitorthefluorescenceincreasewithafluorescencemicroplatereaderatEx/Em=540/590nm(cutoffat570nm).
References&Citations | CitationExplorer |
StructuralsnapshotsofthecatalyticcycleofthephosphodiesteraseAutotaxin
Authors:JensHausmann,Willem-JanKeune,AgnesLHipgraveEderveen,LeonievanZeijl,RobbiePJoosten,AnastassisPerrakis
Journal:JournalofstructuralBIOLOGy(2016)
AAT Bioquest AAT Bioquest是一家位于美国的生物公司,前身为ABD Bioquest,总部位于加利福尼亚州。专门从事光学检测技术十多年,一直致力于光谱学检测领域技术的创新和突破。其独特的光学检测技术,综合了化学、生物学和信息学等各个领域的研究,引领了比色、荧光和发光技术新一代光学探针的浪潮。AAT Bioquest在全球拥有强大的经验丰富的专业分销商网络,为从小型研究机构到《财富》500强企业的各类客户提供卓越的产品和定制服务。
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如果要是直接注射,就不知道了
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1.步骤简单,45分钟内完成测定,比经典Lowry法快4倍而且更加方便。
2.灵敏度高,检测浓度下限达到25μg/ml,最小检测蛋白量达到0.5μg,待测样品体积为1-20μl 。
3.BCA法测定蛋白浓度不受绝大部分样品中的去污剂等化学物质的影响,可以兼容样品中高达5%的SDS,5%的Triton X-100,5%的Tween 20,60,80。
4.在20-2000μg/ml浓度范围内有良好的线性关系。
5.检测不同蛋白质分子的变异系数远小于考马斯亮蓝法蛋白定量。
1.模板提取(一般为RNA):Trizol、氯仿、异丙醇、无水乙醇、DEPC处理水
2.模板浓度测定:分光光度计或NanoDrop
3.逆转录:逆转录试剂盒(或者一步法试剂盒),这一步可以用普通PCR做,也可以用水域做。
4.荧光定量PCR试剂:通常有用SYBR Green Mix做的,但是这里建议你用EvaGreen做,灵敏度和平行性都要好于SYBR Green,并且如果你那是ABI或者Stratagene的PCR如果用SYBR Green还需要加一步Rox很麻烦。
5.其他:除了以上的那些还需要离心管、PCR管或板(Axygen反应比较好)、移液枪等,暂时就想到这么多。
谢谢谢
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