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核酸的定量测定实验一二苯胺法
来自 : 蚂蚁淘
实验方法原理
DNA分子中2-脱氧核糖残基在酸性溶液中加热降解,产生2-脱氧核糖并形成ω-羟基-γ-酮基戊醛,后者与二苯胺试剂反应生成蓝色化合物,其反应为:
 


蓝色化合物在595nm处有最大吸收峰,且DNA在40~400μg范围内时,光密度与DNA浓度呈正比。在反应液中加入少量乙醛,可以提高反应灵敏度。
实验材料
试剂、试剂盒
仪器、耗材
实验步骤
1. 标准曲线的绘制:取干燥试管6支,编号,按下表加入试剂。
 

加完后混匀,于60℃恒温水浴中保温1h,冷却后于595nm处比色测定,以零号管调零点。以DNA浓度为横坐标,光密度为纵坐标,绘制标准曲线。

2. 样品测定:取试管3支,两支为样品管,一支为对照管。对照管操作与标准曲线零号管相同。向每支样品管加2.0ml样品液及4.0ml二苯胺试剂,60℃保温1h,冷却后于595nm处比色测定,以对照管调零点。根据测得的光密度值从标准曲线上查出相应光密度的DNA含量,按下式计算DNA百分含量。
 
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