丙酮酸激酶的测定实验一基本方案
| 实验方法原理 | PK，ATP：丙酮酸磷酸转移酶。 有其他激酶的伴随，这个反应的直接实验： 例如，可以应用P32标记。由分光光度测定出，这个反应与LDH反应偶联，继续NADH的氧化反应： | ||||||||||
|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|
| 实验材料 | 酶样品 试剂、试剂盒 | 三乙醇胺-HClKOHKClMgCl2磷酸烯醇式丙酮酸ADPNADHLDH 仪器、耗材 | 分光光度计 实验步骤 | 实验所需「试剂」具体见「其他」 0.98ml实验混合物
0.02ml酶样品 25℃时，于340nm处吸收值降低，ε340＝6.3×103l/（mol·cm）。 注意事项 | 其他 | 试剂： 0.1mol/L三乙醇胺-HCl/KOH，pH7.6（氯化三乙醇胺，Mr＝185.7；18.6g溶于800mlH2O，用1mol/LKOH调至pH7.6，再补充到1000ml） 0.5mol/LKCl（Mr＝74.6；373mg溶于10ml水中） 0.25mol/LMgCl2（六水合物，Mr＝203.3；508mg溶于10ml水中） 0.01mol/L磷酸烯醇式丙酮酸（PEP，三环己基铵盐，Mr＝465.6；46.6mg溶于10ml水中） 0.1mol/LADP（二钠盐，Mr＝471.2；471mg溶于10ml水中） 0.01mol/LNADH（二钠盐，Mr＝709.4；71mg溶于10ml水中） LDH（商业产品有大约500U/mg，准备溶液时需150U/0.1ml） |
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发布于 ： 2018-08-06
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