货号
:
QS3115
规格：
50
管
/48
样
乙酸激酶（
acetatekinase
，
ACK
）试剂盒说明书
紫外分光光度法
正式测定前务必取
2-3
个预期差异较大的样本做预测定
测定意义：
ACK
主要存在于微生物中，催化乙酸和
ATP
生成乙酰磷酸和
ADP
，是细菌碳代谢和能量代
谢的关键酶，尤其是在古细菌甲烷合成代谢中起着中枢作用。
测定原理：
（
1
）
ACK
催化乙酸钠和
ATP
生成乙酰磷酸和
ADP
；
（
2
）丙酮酸激酶催化
ADP
和
PEP
生成
ATP
和丙酮酸；
（
3
）乳酸脱氢酶催化丙酮酸和
NADH
生成乳酸和
NAD
+
；
（
4
）在
340nm
下测定
NADH
氧化生成
NAD
+
速率，即可反映
ACK
活性；
自备实验用品及仪器：
紫外分光光度计、台式离心机、水浴锅、可调式移液器、
1mL
石英比色皿、研钵、冰和蒸
馏水
试剂组成和配制：
提取液：液体
50mL
×1
瓶，4℃保存；
试剂一：液体
50
mL×1
瓶，4℃保存；
试剂二：粉剂×
1
瓶，
4
℃保存；临用前每瓶加入
4mL
蒸馏水，充分溶解待用。用不完的
试剂仍
4
℃保存；
试剂三：粉剂×
2
瓶，
-20
℃保存；临用前每瓶加入
4mL
蒸馏水，充分溶解待用；用不完
的试剂仍
-20
℃保存；
试剂四：粉剂×
2
瓶，
-20
℃保存；临用前每瓶加入
2.5mL
蒸馏水，充分溶解待用；用不
完的试剂仍
-20
℃保存；
试剂五：粉剂×
2
支，
-20
℃保存；临用前每支加入
1mL
蒸馏水，充分溶解待用；用不完
的试剂分装后
-20
℃保存，禁止反复冻融。
试剂六：液体
800
μ
L×
2
支，
4
℃保存；临用前每支加入
720uL
蒸馏水，充分溶解待用；
用不完的试剂
4℃保存；
试剂七：粉剂×
2
支，
-20
℃保存；临用前每支加入
800uL
蒸馏水，充分溶解待用；用不
完的试剂
4℃保存；
试剂八：粉剂×
2
瓶，
4
℃保存；临用前每瓶加入
4mL
蒸馏水，充分溶解待用。用不完的
试剂仍
4
℃保存。
样本的前处理：
1
、
细菌或培养细胞：
先收集细菌或细胞到离心管内，
离心后弃上清；
按照细菌或细胞数量
（
10
4
个）
：提取液体积（
mL
）为
500~1000
：
1
的比例（建议
500
万细菌或细胞加入
1mL
提取液）
，超
声波破碎细菌或细胞（冰浴，功率
20
％或
200W
，超声
3s
，间隔
10s
，重复
30
次）
；
15
000g
4℃
离心
10min
，取上清，置冰上待测。
2
、组织：按照组织质量（
g
）
：提取液体积
(mL)
为
1
：
5~10
的比例（建议称取约
0.1g
组织，加
入
1mL
提取液）
，进行冰浴匀浆。
15
000g4℃离心
10min
，取上清，置冰上待测。
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