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ELISA双抗体夹心法(enzyme linked immunosorbent assay——sandwich technique)的原理是将特异性抗体结合到固相载体上形成固相抗体,然后和待检血清中的相应抗原结合形成免疫复合物,洗涤后再加酶标记抗体,与免疫复合物中抗原结合形成酶标抗体-抗原-固相抗体复合物,加底物显色,判断抗原含量。
生物帮有相关介绍。编码RNA http://doc.bio1000.com/show-3399.html
1.取出试剂盒室温平衡30min,取出血样放至室温。
2.配标准品:取150uL标准品加入150uL标准品稀释液稀释,依次稀释5次。
3.加样:分别于各反应孔中加入标准品50uL,样品40UL,标准品做复孔,样品做3孔。
4.分别于样品孔中加入10UL抗体。
5.标准品和样品孔中分别加入50uL链酶亲和素-HRP,盖上封板膜,轻轻震荡混匀,37℃温育60min。
6.配洗涤液:将30倍浓缩洗涤液用蒸馏水30倍稀释后备用。
7.洗涤:小心揭开封板膜,弃去液体,甩干,每孔加200uL洗涤液,静置30s后弃去,如此重复5次,拍干。
8.显色:每孔先加入显色剂A 50uL,再加显色剂B 50uL,轻轻震荡混匀,37℃避光显色6min。
9. 终止:每孔加入终止液50uL,终止反应(此时蓝色立即转为黄色)。
10.测定:以空白孔调零,450nm波长依序测量各孔的吸光度。测定应在加终止液10min之内进行。
11.保存结果,收拾桌面。
12.分析处理数据
注意事项
1. 取出板条前恢复到室温后再打开外包装袋,实验中不用的板条立即放回包装中,密闭封口,其余不用试剂应盖好。
2. 实验操作中请使用一次性的吸头,避免交叉污染。
3.实验板孔加入试剂的顺序应一致,以保证所有反应孔的孵育时间一致。
4.洗涤过程中反应孔中残留的洗涤液应在滤纸上充分拍干,勿将滤纸直接放入反应孔中吸水。
5.试剂盒内试剂请在保质期内使用,不同批号试剂不要混用。
6.1000pg/ml以上的结果为非线性的,根据此标准曲线无法得到精确的结果。大于1000pg/ml 的样品应以标准稀释缓冲液稀释后重做。在结果分析时,结合考虑相应的稀释度。
首先要什么有什么的,你得好好考虑一下。
2、看生产地址
根本没有生产地址,我们知道做实验做产品需要很多的仪器、试剂、耗材,没有人相信一间简单的屋子可以生产各种样的试剂盒。
3、看产品包装
没有任何的生产地址、联系方式等信息,这种产品有问题了连个投诉的地方都没有。
4、看公司网站
有些打着国外原装旗号,整个公司网站为英文页面,实际注册IP地址在中国。如果写着国外的地址,让你国外的朋友实地去看一下!
5、做交叉验证
拿对方提供的几个种类的试剂盒,把里面的关键组份相互替换做做实验,如果交叉严重,只能说明是一种原料生产的试剂盒贴了不同的标签。
6、看价格
价格低得离谱,却打着进口大公司原料分装,核算成本,这种低得离谱的价格是连原料都买不起的。
(2)封闭:将已包被的板用洗涤液洗涤2次,每孔加入120 μL封闭液,封闭一段时间,取出,甩干备用。
(3)竞争反应:在制备好的板中每孔加入50 μL系列浓度的标准品溶液和50 μL稀释好的酶标抗体溶液,孵育一段时间。
(4)洗板:用洗涤液洗涤5次。
(5)显色反应:每孔加入显色溶液100 μL,孵育一段时间。
(6)终止:每孔各加入终止液,在酶标仪上测定各孔的吸光值。