描述
ThequbitRNAHSAssayKit,whenusedwiththeQubitFluorometer,providesanaccurateandselectivemethodforthequantitationoflow-abundanceRNAsamples.TheassayishighlyselectiveforRNAandwillnotquantitateDNA,protein,orfreenucleotides.Commoncontaminants,suchassalts,freenucleotides,solvents,detergents,orprotein,arewell-toleratedintheassay.TheassaykitisdesignedtobeaccurateforRNAsampleconcentrationsbetween250pg/µLand100ng/µL.Thekitprovidesconcentratedassayreagent,dilutionbuffer,andpre-dilutedRNAstandards.Simplydilutethereagentusingthebufferprovided,addyoursample(anyvolumebetween1µLand20µLisacceptable),andreadtheconcentrationusingtheQubitFluorometer.
WhichproducttochooseforRNAHS(HighSensitivity)quantitation?
•For1–20samples:usethisQubitRNAHSAssayKitwiththeQubitFluorometer
•For20–2000samples:usetheQuant-iTRNAHSAssayKitwithmicroplatereader
Notes:
1.AllQubitassaykitscanbeusedwiththeQubit1.0,Qubit2.0,Qubit3,andQubit4fluorometers.
2. 500µLthin-walledPCRtubes arerequiredbutnotincluded.
ForResearchUseOnly.Notforuseindiagnosticprocedures.
Invitrogen创立于1987年,公司总部设于加利福尼亚州卡尔斯巴德市。我们为制药和生物技术公司以及学术研究和政府科研机构提供生命科学相关产品与服务。2006年Invitrogen公司(纳斯达克股票代码IVGN),年营业额达12亿美元。作为一家全球性的跨国公司,Invitrogen现有员工4,800余名,在全球超过70个国家和地区设有分支机构。我们为全球的科研工作者提供25,000余种产品和服务,支持疾病研究、新药研发和商业性生物生产。Invitrogen中国总公司,凭借丰富经验,集中人力建立了提供合成,测序及其它多种项目服务的实验生产基地,是唯一一个在同行业中引进6西格码(SixSigma)和精益(Lean)管理方法的公司,公司由有着丰富管理经验的黑带大师(MasterBlackBelt)指导,根据数据来不断优化生产流程,降低成本,提高质量,以及提高发货速度.我们有一个强大的集研发和生产于一体的梯队,队员构成中有归国博士,硕士和本科生。另外我们Invitrogen的美国,欧洲,日本的梯队与我们紧密联系,资源共享,共同传递高质量的产品,提供更新更全更快的技术和服务.全面细致的标准操作程序,严格的入职前培训和在职培训。使我们的产品成为成为您的首选品牌.因此我们相信以Invitrogen在全球的合成与测序业务技术力量为后盾,在我们杰出的技术团队的带领下,将会为您提供高质量、全方位和多角度的服务。
Invitrogen旗下包括Invitrogen、Gibco、MolecularProbes、Dynal、Biosource、Caltag、Zymed、Panvera、InforMax、BioReliance等众多行业顶尖品牌。为分子生物、疾病研究,药物研发和生物制品生产等提供全面的技术和服务。
Invitrogen的壮大历程:
2005
Dynal细胞分离与纯化用磁珠、细胞刺激、蛋白质研究、核酸研究和微生物学
Zymed病理学、癌症和细胞生物产品,一般免疫化学试剂
BioAsia引物合成及测序,合并后的公司称为上海英骏生物技术有限公司
2004
DRIDNA纯化产品和其它核酸
Protometrix蛋白质微阵列技术
BioReliance合同服务机构(CSO)假设测试,为全球生物技术和制药公司提供生物药品开发和生产服务
2003
SequiturRNA干扰技术(RNAi)
MolecularProbes为生物研究和药品开发提供分子分类方面的荧光技术
GeniconSciences超敏感信号产生与探测工具和方法
2002
PanVera生物化学、细胞检验和蛋白质收集
InforMax生物信息软件
2000
LifeTechnologies分子生物和GIBCO细胞培养试剂
Ethrog电泳完全附着系统
ResearchGenetics为基因药品开发研究提供cDNA克隆
1999
NOVEX预制电泳胶
ebiomall.com
一抗和二抗的制备方法什么的,推荐阅读“抗体工程”相关的一些文章和书籍。
简单点的信息,可以看百度百科,查阅“一抗“、“二抗”、“抗体”…
1. 一抗选择
(1)确定抗体的名字,注意中英文名字、别名、亚型等信息。
(2)确定您的实验类型,Elisa,WB,IHC,ICC,或者是FACS。biorbyt的每种抗体说明书都会列出抗体经验证过适用的实验类型,如果抗体说明书没有提及的应用类型,并不意味着该抗体不适用于此种分析应用类型,而仅是说明尚未经过此种实验验证。
(3)确定实验样本的种属,Human,Mouse,Rat等。我们的抗体说明书都列出该抗体验证过的适用物种,可根据说明书列出已验证的种属来选择适合你实验需要的抗体。
(4)样本抗原蛋白的结构性质。了解样本抗原蛋白的结构性质有助于选择最合适的抗体,待测样本蛋白的结构域和样本在提取和处理过程中是否会变性,蛋白空间构象的改变,会影响抗体的免疫亲和反应。
(5)单多克隆抗体的选择。一般单克隆抗体特异性强,但亲和力相对小,检测抗原灵敏度相对就低;而多克隆抗体特异性稍弱,但抗体的亲和力强,灵敏度高,但易出现非特异性染色(可以通过封闭等避免)。
2. 二抗选择
(1)种属来源。主要根据一抗种属来源而决定二抗来源,如一抗是小鼠来源,那二抗就买抗小鼠的即可(羊、兔等均可)。
(2)标记物的选择。有HRP、Biotin、荧光素等标记物。免疫组化,WB二抗主要选择HRP,Biotin标记的二抗,而免疫荧光染色可按实验需要选择不同荧光素标记的二抗,如FITC、Cy3、PE等。
详情可搜索博欧特生物
选择一抗就根据检测蛋白的状态来选,如果有蛋白带标签,就选针对标签的抗体。
如果没有标签,那么就要自己制备一抗。
二抗的选择则主要根据一抗的来源来选择,如果一抗是鼠源的,二抗一般就选用羊抗鼠的就可以了。
如果抗体使用次数太多会使背景变黑吗?
一抗就是你要检测的目的抗体。
GAPDH作为内参的话,也是要孵它的一抗
第一:tritonX-100破膜的原理到底是什么,我以前看过的资料是它是个脂溶性的东东,可以溶解细胞膜和核膜的脂质,从而形成孔洞,让抗体进入,所以有人说tritonx-100又叫打孔剂。一般用0.3%的浓度,PBS稀释。
但是总有人问我,如果是膜蛋白染色,破不破膜?
如果是膜蛋白,要看抗体和抗原的结合位点,如果是跨膜蛋白的话,其结合位点在胞内段的话肯定是需要破膜的。
根据上面的理解,破膜并不会对蛋白造成影响,只是溶解了脂质形成“孔”。
所以我觉得如果条件允许,常规每次都破一下,还是很好的选择。
你的理解是什么呢?
第二:二抗封闭原理的问题。
上一抗之前都要用二抗来源的血清封闭,那么封闭的原理到底是什么。
看资料说是封闭样品中能够与二抗发生非特异性结合位点,降低非特异性显色。用的封闭液是二抗来源的血清。
我的理解:二抗也是抗体,通常用的是说是和一抗的fc端特异性结合的IgG。
如果是减少非特异性结合的话,那么应该是二抗能够跟样品中的某些东西反应,而二抗来源的血清能先进行阻断。
我的问题是:样品中到底是什么物质,可以和二抗来源的血清中的什么物质,进行结合从而阻断。(即样品中,和二抗来源的血清中,分别是两种什么物质发挥作用);
但是一个新的问题产生了,大家一般多用的是BSA封闭,BSA叫做牛血清白蛋白,他是如何起到封闭作用的呢?
第三:最近做免疫荧光,一个不该在细胞核表达的抗体总是出现细胞核的非特异性染色。
本来我怀疑是抗原弥散了,但是细胞是固定过了的啊,而且同样的方法染色另外一个胞浆表达的抗体,就没有这个问题。
白死不得其解,快要愁死了。
谢谢,请大家指导!
@wh2008
@byd123
@skyskytotop
@甲醛
@多聚甲醛
1,5%脱脂奶。
2,3%BSA。
3,5%BSA。
以上都可用PBS配,也可用TBST配。个人经验为,抗体背景高时用脱脂奶好;抗体质量好背景低时用BSA配,效价高可节约抗体。
所以,用PBS稀释了没关系,再加入相应脱脂奶粉或BSA即可。
抗体溶液倒到膜上后,将容器放到一个水平摇床,或者是染色摇床上,缓慢的摇动。可以在4C过夜孵育,也可以在室温孵育1h即可。
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