| Description | |
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| CatalogueNumber | ECM300 | 
| BrandFamily | Chemicon® | 
| TradeName | 
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| Description | QuantiMatrixHumanFibronectinELISA | 
| Overview | TheQuantiMatrix™ELISAkitforthedeterminationofsolublehumanfibronectinprovidessensitivitydownto10-20ng/mLasdeterminedfromculturesupernatantsandpurifiedproteinsamples. TheassayisintheformatofacompetitiveinhibitionELISA.Humanfibronectinispre-coatedonthewellswiththeexceptionofrowH,whichservesasareference.Standardsandsamplesaredilutedandpre-incubatedwith polyclonalrabbitantibodytohumanfibronectin.Thepolyclonalantibodybindstofibronectininthestandarddilutions,andinthesample,ifpresent.Themixtureisthentransferredtothehumanfibronectin-coatedplate.Freerabbitanti-humanfibronectinbindstothefibronectinontheplate.Goatanti-rabbitIgGHRPconjugatereactswithboundrabbitanti-fibronectin.WhenHRPsubstrateisadded,abluecolordevelops.Thereactionisstoppedbytheadditionofanacid,changingthecolortoyellow.ThiscolorisquantitatedusinganELISAreader;theintensityofthecolorisinverselyproportionaltotheamountoffibronectinintheoriginalsample.Astandardcurveisconstructedandsamplevaluesareinterpolated.  | 
| BackgroundInformation | ThedeterminationoflevelsofextracellularmatrixmoleculesisbecomingmoreimportanttounderstandingalterationsinmatrixfunctionduringdevelopmentandtumOrigenesis.Questionsofmatrixgeneregulationandfunctionrequireasensitivemeansofdeterminingthelevelsofproteinexpressionbycells.TheQuantiMatrix™ELISAkitforthedeterminationofsolublehumanfibronectinprovidessensitivitydownto10-20ng/mLasdeterminedfromculturesupernatantsandpurifiedproteinsamples. TheassayisintheformatofacompetitiveinhibitionELISA.Humanfibronectinispre-coatedonthewellswiththeexceptionofrowH,whichservesasareference.Standardsandsamplesaredilutedandpre-incubatedwithpolyclonalrabbitantibodytohumanfibronectin.Thepolyclonalantibodybindstofibronectininthestandarddilutions,andinthesample,ifpresent.Themixtureisthentransferredtothehumanfibronectin-coatedplate.Freerabbitanti-humanfibronectinbindstothefibronectinontheplate.Goatanti-rabbitIgGHRPconjugatereactswithboundrabbitanti-fibronectin.WhenHRPsubstrateisadded,abluecolordevelops.Thereactionisstoppedbytheadditionofanacid,changingthecolortoyellow.ThiscolorisquantitatedusinganELISAreader;theintensityofthecolorisinverselyproportionaltotheamountoffibronectinintheoriginalsample.Astandardcurveisconstructedandsamplevaluesareinterpolated.  | 
| ProductInformation | |
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| Components | 
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| Detectionmethod | Chromogenic | 
| StorageandShippingInformation | |
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| StorageConditions | Storethekitandallcomponentsat2-8°C. PRECAUTIONS: HumanfibronectinwaspurifiedfromhumanplasmathattestednegativeforHBsAgandHIV.However,allmaterialsshouldbehandledcarefullyandinaccordancewithgoodlaboratorypractices. Theinstructionsprovidedhavebeendesignedtooptimizeperformance.Deviationsfromthesuggestedproceduremayresultinsub-optimalperformanceofthekitandfailuretoproduceaccuratedata. Donotmixorsubstitutereagentsfromdifferentkitlots.  | 
| BIOLOGicalInformation | |
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| SpeciesReactivity | 
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| AnalytesAvailable | 
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| EntrezGeneNumber | |
| EntrezGeneSummary | Thisgeneencodesfibronectin,aglycoproteinpresentinasolubledimericforminplasma,andinadimericormultimericformatthecellsurfaceandinextracellularmatrix.Fibronectinisinvolvedincelladhesionandmigrationprocessesincludingembryogenesis,woundhealing,bloodcoagulation,hostdefense,andmetastasis.Thegenehasthreeregionssubjecttoalternativesplicing,withthepotentialtoproduce20differenttranscriptvariants.However,thefull-lengthnatureofsomevariantshasnotbeendetermined. | 
| GeneSymbol | 
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| UniProtNumber | |
| UniProtSummary | FUNCTION:SwissProt:P02751#Fibronectinsbindcellsurfacesandvariouscompoundsincludingcollagen,fibrin,heparin,DNA,andactin.Fibronectinsareinvolvedincelladhesion,cellmotility,opsonization,woundhealing,andmaintenanceofcellshape.InteractionwithTNRmediatesinhibitionofcelladhesionandneuriteoutgrowth(Bysimilarity). SIZE:2386aminoacids;262607Da SUBUNIT:Mostlyheterodimersormultimersofalternativelysplicedvariants,connectedby2disulfidebondsnearthecarboxylends;toalesserextenthomodimers.InteractswithFBLN1,AMBP,TNR,LGALS3BPandCOL13A1. SUBCELLULARLOCATION:Secreted,extracellularspace,extracellularmatrix. TISSUESPECIFICITY:PlasmaFN(solubledimericform)issecretedbyhepatocytes.CellularFN(dimericorcross-linkedmultimericforms),madebyfibroblasts,epithelialandothercelltypes,isdepositedasfibrilsintheextracellularmatrix.Ugl-Y1,Ugl-Y2andUgl-Y3arefoundinurine.DEVELOPMENTALSTAGE:Ugl-Y1,Ugl-Y2andUgl-Y3arepresentintheurinefrom0to17yearsofage. PTM:Sulfated. SIMILARITY:SwissProt:P02751##Contains12fibronectintype-Idomains.&Contains2fibronectintype-IIdomains.&Contains16fibronectintype-IIIdomains.  | 
| PhysicochemicalInformation | 
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| Dimensions | 
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| MaterialsInformation | 
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| MaterialsInformation | 
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2006年,在完成了对Chemicon、Upstate、Linco等著名品牌的收购之后,密理博生物科学部除了提供传统的除菌过滤、超滤、蛋白质转印、免疫诊断、环境监测等分离纯化产品和技术之外,更增加了实验室研究所需的各种检测试剂、细胞培养产品,主要覆盖干细胞、神经生物学、肿瘤、细胞信号转导、药物开发等领域,从而成为生命科学领域的策略性供应商,为您提供更广泛的研发工具,同步共享全球专业技术,提升您的科研平台,加速您的科研进程。该部门拥有的著名品牌有:Millex、Millicell、Amicon、Durapore、Multiscreen、Montage、Multiplex、Stericup、Chemicon、Upstate、4G10、Luminex、Catch、Release和Beadlyte等。
密理博(Millipore)公司成立于1954年,总部位于美国麻省,在全世界设有47个办事处,为100多个国家提供产品和技术服务。目前全球雇员超过5800人,在美国、法国和日本等国家拥有7家大型生产工厂,主要生产过滤膜及膜过滤产品。
20世纪80年代,密理博公司进入中国市场。先后在香港、北京、上海、广州及成都设立了办事机构,并于2000年4月在上海浦东外高桥保税区建立了密理博(上海)贸易有限公司。
为了更好地满足中国用户的需求,密理博中国主页(www.millipore.com/cn)于2006年11月向广大用户开放,介绍密理博中国有限公司的最新动态,力求为用户打造专业的产品与服务信息交流平台。
产品与服务
密理博公司产品按应用范围可划分为4大部分:实验室纯水、生命科学、膜技术和生物工程及制药。
目前,密理博实验室纯水设备在行业内占据绝对主导地位。从经典的MIlli-Q超纯水系列,Elix纯水系统,RiOs反渗透纯水系统,到新型的Simplicity、Direct-Q等小流量应用系统,密理博的纯水生产设备已成为实验室纯水行业的金标准。膜技术则为免疫诊断试纸条、免疫浓缩检测装置的生产提供全套膜材料,并提供各种材质、孔径的过滤膜及即用式过滤装置,还有专为医疗设备配套的批量供应的一次性过滤器。密理博生命科学的过滤、超滤产品及蛋白印迹系列产品也得到广泛应用,蛋白质组、基因组系列试剂盒以及用于新药开发的多孔滤膜板日益得到用户的认可。2006年,密理博在生命科学领域又迈出了重要一步,完成了对Serologicals公司的合并,这一举措使得产品涉及的广度明显增强,大大加强了Millipore全面服务各个领域的能力,从而进一步确立了密理博的行业领先地位。
除实验室产品外,密理博同样为生物工程和制药企业提供高品质的纯化设备与服务。密理博的滤器、超滤器、反渗透系统、层析系统、层析柱及层析填料,用于药品及生物制品的澄清、分离、纯化、浓缩,和最终产品的除菌、除热原、除病毒,可以满足从小试、中试到大规模生产的各种需求;并可以帮助用户进行过滤、超滤系统的设计、评估及GMP要求的设备验证。此外还提供制药行业、食品饮料行业,微电子行业全面的质量控制产品与服务。
密理博不仅拥有优秀的产品,更提供专业的技术支持服务。在将经销网络覆盖至全国的同时,密理博在全国各省、市、自治区都配备了专业维护工程师,建立了一支技术成熟、认真负责的销售、维修及后勤队伍,以确保中国各个地区的用户都可以方便快捷地得到服务。同时密理博还拥有完善的培训体制,除了每年对公司内部工程师的培训,2006年9月,密理博公司在上海办事处成立了Millipore培训中心,定期为经销商的维修专员进行培训。此外,密理博还在全国多个重点高校和研究机构建立了示范实验室。
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                                                    ELISA双抗体夹心法(enzyme linked immunosorbent assay——sandwich technique)的原理是将特异性抗体结合到固相载体上形成固相抗体,然后和待检血清中的相应抗原结合形成免疫复合物,洗涤后再加酶标记抗体,与免疫复合物中抗原结合形成酶标抗体-抗原-固相抗体复合物,加底物显色,判断抗原含量。
生物帮有相关介绍。编码RNA http://doc.bio1000.com/show-3399.html
请大家帮帮忙,第一步加完抗原后必须封闭吗
表面抗体是双抗原夹心法
E抗体和核心抗体是竞争抑制法或间接法
在这种测定方法中有3种必要的试剂:①固相的抗原或抗体(免疫吸附剂) ②酶标记的抗原或抗体(标记物)③酶作用的底物(显色剂)
测量时,抗原(抗体)先结合在固相载体上,但仍保留其免疫活性,然后加一种抗体(抗原)与酶结合成的偶联物(标记物),此偶联物仍保留其原免疫活性与酶活性,当偶联物与固相载体上的抗原(抗体)反应结合后,再加上酶的相应底物,即起催化水解或氧化还原反应而呈颜色。
其所生成的颜色深浅与欲测的抗原(抗体)含量成正比。 这种有色产物可用肉眼、光学显微镜、电子显微镜观察,也可以用分光光度计(酶标仪)加以测定。其方法简单,方便迅速,特异性强。向左转|向右转
2.加大辣根过氧化物酶标记的链霉亲和素;
1.标准曲线的标准品是否一定要梯度稀释,为什么?我试过非梯度稀释的,也可以达到线性R2=0.99.
2.我用了CurveExpert做标曲,自动搜索后发现有10种提供的方程,各种形式的,其中一个十分适合我的实验结果(LogisticModel),而其他的感觉又不适合,因为结果常常为负值。这又是为啥捏?
3.实验的酶标仪最大OD值可以测到4,如果我的测量结果在1.3,是否像其他人所说的>1了就不准确了。
4.利用夹心法进行定量分析是否一定要使用线性方程?
不好意思啊,一下问了这么多问题,最近做了一个月的ELISA,完全摸不清头脑啊。谢谢各位了

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