R1: Detection Reagent 1 | R2: Detection Reagent 2 |
Tris buffer PH 7.5 → 50mmol/L | Tris buffer PH 7.5 → 50mmol/L |
4-AAP → > 3.0mmol/L | Adenosine → 20mmol/L |
POD → 0.7KU/L | Sodium 3-(N-ethyl-3-methylanilino) |
XOD → 0.3KU/L | -2-hydroxypropanesulfonate → 2.0mmol/L |
PNP → 0.15KU/L |
Abbexa是一家致力于为生命科学研究、药物研发及生物技术公司提供优质抗体、蛋白及检测试剂盒等产品的高科技生物技术公司。基于剑桥大学研发技术优势,Abbexa提供包括一抗、二抗、纯化蛋白、ELISA试剂盒、各种酶类及其它多种试剂与研究工具的大量生命科学研究产品。
目前Abbexa的产品涵盖单克隆抗体、多克隆抗体、纯化蛋白质及生物试剂,此外,为满足研发人员特殊的实验需要,Abbexa还提供抗体/多肽定制服务。严格的质控标准保证了Abbex产品的高性能,如您对产品不满意,Abbexa将直接提供退/换货服务
CLIAKits 化学发光免疫分析(chemiluminescenceimmunoassay,CLIA) RNAInterferenceProducts RNA干扰试剂 RNA干扰(RNAinterference,RNAi)是指在进化过程中高度保守的、由双链RNA(double-strandedRNA,dsRNA)诱发的、同源mRNA高效特异性降解的现象。基因沉默,主要有转录前水平的基因沉默(TGS)和转录后水平的基因沉默(PTGS)两类:TGS是指由于DNA修饰或染色体异染色质化等原因使基因不能正常转录;PTGS是启动了细胞质内靶mRNA序列特异性的降解机制。有时转基因会同时导致TGS和PTGS。 由于使用RNAi技术可以特异性剔除或关闭特定基因的表达,(长度超过三十的dsRNA会引起干扰素毒性)所以该技术已被广泛用于探索基因功能和传染性疾病及恶性肿瘤的治疗领域。 1. RNAi抑制转座子活性 两方面的证据提示转座子活性的抑制与siRNA有关 ①发现蠕虫mut-7基因参与RNAi并且与转座子的转座抑制有关; ②在果蝇中,参与RNAi的RNA解螺旋酶Spindle-E的突变将导致该基因引起的基因沉默的缺失,同时提高了反转录转座子活性。 2. RNAi抵御病毒感染 在拟南芥中研究转基因引起基因沉默时发现,sgs2/sde1基因突变的拟南芥对病毒的侵染表现出高度的敏感性。 3. RNAi参与异染色质的形成和维持 Hall等研究表明,着丝粒同源重复序列和RNAi组分一起正负调节着异染色质的形成并共同促使异染色质组装成核;Vople等在敲除裂殖酵母(S.pombe)的RNAi途径基因(如Argonaute、Dicer、RDRP)时发现异染色质转录得到的dsRNA可以在RNAi途径的参与下,加工成siRNA,siRNA募集异染色质蛋白1(HP1),然后靶向性引起相应异染色质区域的转基因沉默。 4. RNAi参与机体的发育调控及生理代谢 RNAi只抑制转录后的基因,所以RNAi在生物体发育学研究中具有优势。Chuang等用RNAi技术进一步证实了AG、CLV3、AP1、PAN等已知功能基因在拟南芥花发育过程中的功能。在RNAi过程中形成的RISC复合物可根据不同情况分别利用siRNA或stRNA行使不同的功能,但最终均导致特定基因沉默。 IsotypeControl 同型对照 同型对照(IsotypeControl),使用与一抗相同种属来源、相同亚型、相同剂量和相同的免疫球蛋白及亚型的免疫球蛋白,用于消除由于抗体非特异性结合到细胞表面而产生的背景染色。 同型对照 同型对照的主要目的是确定一抗的结合是特异性的,而不是非特异性的Fc受体或与其他蛋白的相互作用。还可以用来竞争性的结合抗体,与功能阻断抗体发挥同样的功能。 同型对照要与一抗的来源,Ig分型和标记完全一致。 如果一抗是多抗,可以用annormalserum(与一抗相同的正常血清)(mustbethesamespeciesasprimaryantibody)。Thiscontroliseasytoachieveandcanbeusedroutinelyinimmunohistochemicalstaining.这个可以咨询试剂商。同型对照为免疫荧光标记中的阴性对照。由于荧光标记单抗的组来源不同,应选用相同来源的未标记单抗作为同型对照来调整背景染色。举个例子:比如检测一抗为单抗的mouseantiratCD11b,cloneOX-42purifiedIgG,那么它的isotype是mouseIgG2a,所以可以用purified(纯化的)mouseIgG2a来做OX-42的同型对照(IsotypeControl)。一般的的生物技术公司和国内的代理都有出售。 同型对照:是指与MoAb相同的、未免疫小鼠的免疫球蛋白亚类,若使用直接免疫荧光染色法,同型对照也应标记荧光色素,如IgG1FITC、IgG2a、PE等。主要考虑了细胞的自发荧光、FC受体介导的抗体结合和非特异性抗体结合等影响因素。此外,同型对照与MoAb所标记的荧光色素、浓度、F:P比值(标记的荧光色素与免疫球蛋白分子的比值)应该相同为最佳,这对准确设定阴性与阳性细胞的界标有重要意义,切忌使用与MoAb不相匹配的同型对照,最好为同一实验室、采用相同工艺或方法制备(如同一品牌)的产品。
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需要的仪器有:酶标仪、恒温箱、枪、枪头、烧杯、滤纸.当然有自动洗板机最好.
DAS-ELISA试剂盒中抗体有包被抗体和酶标抗体,这两种抗体是一种抗体,前者没有酶标,后者用酶进行了标记。
NCM-ELISA一般有一抗和二抗,这两种抗体不一样,前者(一抗)一般是鼠抗体或兔抗体,没有酶标,相对应的二抗一般是羊抗鼠或羊抗兔抗体,用酶进行标记。也有用马大规模备抗体的。
TDS-ELISA是三抗体ELISA,第三级的抗体是将信号级联放大。
以上三种是比较常见的,还有其他一些试剂盒,可参考免疫学的内容。
1.取出试剂盒室温平衡30min,取出血样放至室温。
2.配标准品:取150uL标准品加入150uL标准品稀释液稀释,依次稀释5次。
3.加样:分别于各反应孔中加入标准品50uL,样品40UL,标准品做复孔,样品做3孔。
4.分别于样品孔中加入10UL抗体。
5.标准品和样品孔中分别加入50uL链酶亲和素-HRP,盖上封板膜,轻轻震荡混匀,37℃温育60min。
6.配洗涤液:将30倍浓缩洗涤液用蒸馏水30倍稀释后备用。
7.洗涤:小心揭开封板膜,弃去液体,甩干,每孔加200uL洗涤液,静置30s后弃去,如此重复5次,拍干。
8.显色:每孔先加入显色剂A 50uL,再加显色剂B 50uL,轻轻震荡混匀,37℃避光显色6min。
9. 终止:每孔加入终止液50uL,终止反应(此时蓝色立即转为黄色)。
10.测定:以空白孔调零,450nm波长依序测量各孔的吸光度。测定应在加终止液10min之内进行。
11.保存结果,收拾桌面。
12.分析处理数据
注意事项
1. 取出板条前恢复到室温后再打开外包装袋,实验中不用的板条立即放回包装中,密闭封口,其余不用试剂应盖好。
2. 实验操作中请使用一次性的吸头,避免交叉污染。
3.实验板孔加入试剂的顺序应一致,以保证所有反应孔的孵育时间一致。
4.洗涤过程中反应孔中残留的洗涤液应在滤纸上充分拍干,勿将滤纸直接放入反应孔中吸水。
5.试剂盒内试剂请在保质期内使用,不同批号试剂不要混用。
6.1000pg/ml以上的结果为非线性的,根据此标准曲线无法得到精确的结果。大于1000pg/ml 的样品应以标准稀释缓冲液稀释后重做。在结果分析时,结合考虑相应的稀释度。
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