成都一零一医药有限公司 去批发 > 联系方式：028-66321970 招商区域：四川省 招商级别：省级代理 |地区代理 |小包_自然人 适合市场：三级医院 |二级医院 |乡镇卫生院 |诊所 |药店 经营规格：7.5g×12 产品卖点： 【正文】人乳头瘤病毒(HPV)核酸扩增(PCR)荧光检测试剂盒说明书Operation Instruction for Human Papilloma Virus PCR Fluorescence Diagnostic Kit方法原理感染生殖道的HPV有30多个型，HPV感染引发的病症与感染部位和HPV型有关。HPV浸染生殖道表皮细胞常可引起细胞增生形成尖锐湿疣，宫颈口粘膜细胞感染HPV则引发多种病变，有的可最终演变成宫颈癌。研究表明，引起尖锐湿疣的HPV型多为HPV6和HPV11，这两个型一般不致癌；宫颈癌组织中发现的HPV型以HPV16和HPV18最多。目前临床常用的检测方法主要是物理检杳和细胞学巴氏染色法，人乳头瘤病毒(HPV)核酸扩增(PCR)荧光检测试剂盒采用荧光探针检测技术结合核酸扩增(PCR)方法，能检测尖锐湿疣患者疣体表皮脱落细胞及妇女宫颈上皮细胞中的4种人乳头瘤病毒(HPV)核酸DNA，合并检测HPV 6型和11型的核酸DNA，分型检测HPV16型和HPV18型的核酸DNA。可用于人乳头瘤病毒(HPV)的辅助诊断。本试剂盒采用荧光探针检测技术结合PCR扩增方法，将高度保守的HPV编码晚期蛋白的L1基因作为靶基因，设计HPV型特异性引物和探针，靶序列大小在100bp至500bp之间，探针均标记为FAM荧光基团。在PCR扩增过程中,特异性引物和探针分别与靶序列结合，Taq酶在引物的引导下复制靶序列；当遇到结合在两条引物之间的探针时，发挥5′端外切酶功能，将探针水解，水解下来的FAM荧光基团受激发发射荧光，每合成一条DNA链发射一次荧光信号。当靶序列呈指数增长时，发射的荧光信号量相应增长，因此只要标本中含相应型别的HPV病毒就会有荧光信号的积累，从而达到检测HPV DNA的目的。反应体系中还使用了UNG酶，该酶能在PCR反应开始前消除PCR产物(U-DNA)污染，避免了因污染产生的假阳性。试剂盒组成（48tests/kit）贮存条件及有效期本试剂盒要求贮存在－20℃，有效期12个月（请于有效期内使用）适用仪器1．PE Gene Amp 5700/7700/7000荧光PCR检测仪2．BIO-RAD iCycler荧光PCR检测仪3．Roche LightCycler荧光PCR检测仪4．Rotorgene-2000荧光PCR检测仪5．MJ Opticon Monitor荧光PCR检测仪仪器使用说明:由于不同的荧光PCR检测仪的工作原理等略有不同，在仪器设定及结果分析时参照以下原则:PE Gene Amp 7000、MJ Opticon Monitor荧光PCR检测仪参照PE Gene Amp 7700荧光PCR检测仪；Rotorgene-2000荧光PCR检测仪参照BIO-RAD iCycler荧光PCR检测仪；其它单荧光PCR检测仪设定及结果分析参照PE Gene Amp 5700荧光PCR检测仪。具体操作参照各仪器操作使用说明。样本采集、存放及运输1．采集:采集分泌物及表皮脱落细胞。要求受检者在采样前24小时内，禁止性生活、生殖器冲洗或上药。对于生殖器或肛周有疣状体增生，怀疑为尖锐湿疣的患者，用生理盐水浸湿的棉拭子，用力来回擦拭疣状组织表面数次，取得疣体表皮脱落细胞。对于女性可疑宫颈HPV感染者，先用窥器暴露宫颈，以无菌干棉球轻轻拭去宫颈表面粘液，然后用子宫颈刷或刮板在子宫颈外口与子宫颈交界处以外口为中心向左右各旋转一周，取宫颈上皮细胞。对于其他无症状可疑HPV感染者，用棉拭子擦拭好发部位或原感染部位数次，好发部位多为肛门、会阴、阴茎、阴道口、外阴等处。如果采样部位分泌物过多，则应在采样前用湿棉拭子拭净过多分泌物。将采样拭子宫颈刷或刮板浸入备有1ml无菌生理盐水的样本管中，充分漂洗后，丢弃采样器具。样本在室温放置不超过3小时，4℃保存不超过24小时。2．存放:－20℃保存不超过三个月，－70℃可长期保存，应避免反复冻融。3．运输:采用冰壶加冰或泡沫箱加冰密封进行运输。使用方法1．样本及阴性对照处理（样本处理区）（阳性对照无需处理）1．1．取出样本及阴性?哉眨檬椅禄澈螅竦椿煸取Ｈ缓蟾魅〕?00ul样本，13,000rpm离心10min,小心吸弃上清，保留沉淀物。1．2．加入50ul DNA提取液2至样本沉淀物中，振荡混匀。100℃沸水浴/干浴10min。1．3．13,000rpm离心10min，保留上清用于检测。如果样本裂解产物当天不使用，建议保存在－20℃。2.核酸扩增2．1．试剂配制（PCR前准备区）将核酸扩增试剂PCR反应液、Taq酶及UNG，置室温解冻后，2,000rpm离心10秒。然后按下表配制工作反应液（每份用量）。反应体系 PCR反应液 Taq酶UNG40ul37.6ul 0.4ul0.06ul20ul17.8ul 0.2ul0.03ul每份标本用三种PCR反应液检测，每种反应液均配制n份工作反应液，按18ul/份或38ul/份分装至各PCR反应管中，然后将反应管转移至样本处理区。n=样本数+1（阴性对照）+1（临界阳性对照）+1（强阳性对照）2．2．加样（样本处理区）若样本及对照品裂解产物保存在－20℃，使用前置室温解冻，以12,000rpm离心3分钟。依次向各反应管中加入2ul样品（包括样本及对照品裂解产物），盖严管盖。转移反应管至检测区，将反应管按次序（阴性对照，临界阳性对照，强阳性对照及样本等），依次置于荧光PCR检测仪上。2．3．PCR扩增（检测区）按下表设置PCR扩增条件:结果分析基线确定:一般以仪器默认值为准，当出现少数样本扩增曲线的噪音太大等特殊情况时可适当调整。阈值确定:原则上使阈值线刚好超过正常阴性样本噪音线的最高点。质控标准1．阴性对照无CT值或CT值为40（0）2．强阳性对照的CT值≤303．临界阳性对照CT值≤374．如果上述条件之一不符，建议重新检测。结果判断1．结果判断标准:将Cutoff值定为CT值37，CT值小于等于37的阳性；CT值38-40（42）之间为灰区范围，灰区样本应重新检测。2．报告结果按下表报告检测结果试剂盒使用注意事项1.有关实验室管理规范严格按照行业行政主管部门颁布的有关基因扩增检验实验室的管理规范执行。2.本试剂盒仅用于体外检测。HPV6/11 PCR反应液用于同时检测HPV6型及11型核酸，HPV16 PCR反应液用于检测HPV16型核酸，HPV18 PCR反应液用于检测HPV18型核酸。3.实验请严格分区操作:第一区:PCR前准备区—准备扩增所需试剂；第二区:样本处理区—待测样本和对照品处理；第三区:检测区—PCR扩增检测。4.各区物品均为专用，不得交叉使用，避免污染，实验后即请清洁工作台。5.试剂盒内各试剂使用前，充分融化后请稍事离心。6.在－20℃保存的样本裂解产物，应在加样前置室温解冻，作短暂离心后使用。7.分装有反应液的反应管应扣盖或装入密实袋内再转移至样本区。8.加样时应使样品完全落入反应液中，不应有样品粘附于管壁上，加样后应尽快盖紧管盖。9.扩增完毕立即取出反应管，密封在专用塑料袋内，丢弃于指定地点。10.反应液分装时应尽量避免产生气泡，上机前注意检查各反应管是否盖紧，以免荧光物质泄露污染仪器。11.实验中用过的吸头请直接打入盛有1%次氯酸钠的废物缸内，并与其他废弃物品一同灭菌后丢弃。12.工作台及各物品定期用1%次氯酸钠、75%酒精或紫外灯进行消毒。13.建议使用离心管和吸头一览表14.区域内必备物品一览表深圳市匹基生物工程股份有限公司地址:深圳市深南大道市高新技术工业村R3-B,6F邮编:518057电话:（0755）26504888免费电话:8008301798传真:（0755）26733666网址:www.szpg.com