简谈AMV逆转录酶
AMV逆转录酶从鸟类成髓细胞白血病病毒（amv）中分离出来的，它拥有双重活性：1.5>3依赖引物的聚合酶活性，可以以RNA或DNA作为模板；2.具有3>5RaseH活性，可以降解RNA/DNA杂合体中的RNA，它需要Mg2+或Mn2+激活。它可用于双脱氧法测定DNA或RNA的序列和以短的RNA为模板合成cDNA。AMV逆转录酶在37℃-55℃的温度范围内有活性，最适温度为41℃-45℃，在以TobaccoVeinMottlingVirus（TVMV）RNA（约10kb）作模板的情况下，AMVRT（20Units/μl）可使60%的模板被反转录，其中25%被合成为全长的cDNA。
与小鼠反转录病毒（MMLV）由来的反转录酶不同，本酶在4mM焦磷酸钠存在下也能合成cDNA，但此时的最适温度为37~40℃。浓度为25units/μl，-20℃保存。
应用：
1.RT-PCR和cDNA合成；
2.RNA测序和双脱氧法测DNA序列；
3.引物延伸和DNA片段3`-末端的标记。
4.逆转录和合成cDNA的第一条链；
逆转录酶白血病病毒模板反转录
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发布于 ： 2021-07-28
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