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细胞培养耗材选购杂谈-资讯-分析测试百科网wiki版
2024-04-28
细胞培养器材的选择：从大小来讲，细胞培养瓶约可分为约600ml，250ml，50ml和25ml的，一般都经过表面改性处理，适合细胞贴壁和生长。600ml 、300ml的多用于大规模培养时用（如单克隆细胞的培养等），50ml的多用于一般性细胞实验用（一般性的传代，保存细胞，为实验提供细胞等），25ml一般是用来复苏细胞或细胞较少时的培养，还有做原代细胞时也可以做多瓶而避免交叉污染。当然还有其他如圆形的等，都可根据个人爱好和实验需要自己选择。 根据细胞培养瓶制作材料的不同，也有玻璃和塑料之分，这里谈一点自己的浅见。不同的细胞对胰酶的敏感度不一样，所以在实验中我们常常会遇到一些细胞消化半天也没有起色，导致细胞状态不断下滑，直至最后的死亡以至于实验进展的不顺利。当然，有时候是可以通过加一些EDTA等来增强胰酶的能力，或者提高胰酶的浓度来实现，在培养一些细胞过程中，我发现，一些细胞对玻璃和塑料制品粘......阅读全文 免疫共沉淀(Co-IP) 实验方法原理 免疫共沉淀（Co-Immunoprecipitation）是以抗体和抗原之间的专一性作用为基础的用于研究蛋白质相互作用的经典方法。是确定两种蛋白质在完整细胞内生理性相互作用的有效方法。其原理是：当细胞在非变性条件下被裂解时，完整细胞内存在的许多蛋白质－蛋白质间的相互作用被保留了下来。如 人滑膜细胞培养实验 实验方法原理 滑膜细胞是衬于关节内表面的细胞性内膜和内膜下层，分为A型滑膜细胞(滑膜巨噬细胞)和B型滑膜细胞(滑膜成纤维细胞)．其中A型细胞最显著的功能是吞噬作用和胞饮作用，该型细胞 人滑膜细胞培养实验 实验方法原理 滑膜细胞是衬于关节内表面的细胞性内膜和内膜下层，分为A型滑膜细胞(滑膜巨噬细胞)和B型滑膜细胞(滑膜成纤维细胞)．其中A型细胞最显著的功能是吞噬作用和胞饮作用，该型细胞 酵母前体mRNA剪接提取物实验 真核生物前体 mRNA ( pre-mRNA ) 的剪接分为两步，即先从前体切去内含子，然后将两个外显子连接在一起形成成熟的 mRNA。本实验来源「RNA 实验指导手册」主编：郑晓飞。实验方法原理剪接反应的典型做法是使用核提取物，即 S100 提取物补充 SR 蛋白或粗提取物的部分纯化组 人类外周血染色体制备 实验方法原理人的外周血淋巴细胞培养疗法是1960年由Moorhead提出来的。正常情况下，人外周血小淋巴细胞都处在G1期(或G0期)。但在体外给予一-定的条件，进行培养，经72h就可获得大量的有丝分裂细胞。这种取材简易、用血量少的培养方法已被广泛采用。在培养液中加入植物血凝素(PHA)，淋巴细胞受到 细胞计数实验 实验方法原理 细胞悬液制备后，需要计算悬液中所含细胞数量；一般以细胞数/毫升表示。因只有健康的细胞才有活力，接种后能够生长增殖，所以在接种关应先检查一下细胞的活力。 细胞计数实验 实验方法原理 细胞悬液制备后，需要计算悬液中所含细胞数量；一般以细胞数/毫升表示。因只有健康的细胞才有活力，接种后能够生长增殖，所以在接种关应先检查一下细胞的活力。 痘苗DNA检测实验——PCR 法 除了 PCR 和 Southern 杂交可以检测病毒 DNA 外，也可以利用 DNA 点迹杂交方法检测在分离的噬斑中的重组病毒。本实验主要介绍用这3种方法来检测痘苗DNA。实验材料贴壁生长良好的单层 BS-C-1 或 HuTK-143B 细胞重组病毒噬斑悬液试剂、试剂盒PBS胰酶／EDTA干冰／乙醇 细胞计数实验 实验方法原理细胞悬液制备后，需要计算悬液中所含细胞数量；一般以细胞数/毫升表示。因只有健康的细胞才有活力，接种后能够生长增殖，所以在接种关应先检查一下细胞的活力。实验材料细胞悬液试剂、试剂盒台盘蓝酒精培养液仪器、耗材吸管实验步骤1. 计数板用96%酒精冲洗计数板后，用干净鹿皮擦净，另擦净 利用 Polybrene 进行 DNA 转染实验 实验材料 指数生长的哺乳动物细胞试剂、试剂盒 DMSO(30%) 含血清培养基Giemsa 染液甲醇Polybrene丁酸钠要转染的 DNA仪器、耗材 最低基础培养基组织培养皿实验步骤 材料缓冲液与溶液贮存液、缓冲液与试剂的成分见附录 1。稀释贮存液至所需浓度。DMSO(30%)/含血清培养基第 3 药物对动物体内NK细胞活性的影响实验 实验方法原理 肺癌是最常见的严重严胁人类健康和生命的恶性肿瘤之一， 机体免疫功能低下，与肺癌的发生发展密切相关。实验材料 小鼠试剂、试剂盒 RPMI1640 培养基中止液Hank. s曲拉通X-100仪器、耗材 酶联免疫监测仪96 孔24 孔平底培养板离心沉淀机实验步骤 1. 动物分组及 小脑颗粒神经元的原代培养实验 实验方法原理小脑颗粒神经元的体外培养受取材部位、特殊培养条件等因素的影响，易于获得纯度较高的培养物。该细胞为双极突起，常用来研究神经突起的生长。其培养条件具有高浓度钾离子依赖特性，常用来作为诱导神经元凋亡的研究模型。当成熟颗粒神经元的培养液由高KCl(通常是25-30mmol/L)换为低KC!(基本 磷酸钙介导的高分子量基因组 DNA 转染细胞实验 下述方法是对 Graham 与 Van der Eb(1973) 建立的磷酸转方法的改进，用高分子量基因组 DNA 代替了质粒 DNA。这一方法对建立稳定的携带补充宿主染色体基因突变的转染基因的细胞系尤其有用（Segeetal.1984,Kingsley et al.1986)。本实验来源于分子克隆 从哺乳动物细胞中制备核和细胞质提取物 实验方法原理 实验材料 转瓶或单层培养的哺乳动物细胞（如HeLa细胞）试剂、试剂盒 PBS低渗缓冲液高盐缓冲液含1. 2 mol L KCl透析缓冲液液氮仪器、耗材 贝克曼 JS4. 2 转子或相当的转子50 mL 圆锥形刻度聚丙烯离心管（对较小体积的提取物也可用 15 mL 的离心管）Doun 利用 Polybrene 进行 DNA 转染实验 下面讲述的 Polybrene 与 DMSO 转染的方法是 Aubin 等（1997) 方法的改进。利用此方法可以有效地将质粒 DNA 转染中国仓鼠卵巢细胞与角化细胞，产生的转化体比磷酸钙-DNA 沉淀物方法的多 15 倍。但是使用高分子量 DNA 时两种方法的转染效率无明显差别。本实验来源于分子克 纯化剪接因子SR蛋白实验 实验方法原理 前体 mRNA ( pre-mRNA ) 剪接因子 SR（serine/argininc rich，富含丝/苏氨酸）蛋白家族是将剪接体组装到前体 mRNA 上的重要参与者。SR 蛋白是重要的剪接因子，该家族的不同成员可以在体外或体内指导选择性剪接位点的选择。实验材料 超纯硫酸铵 氮舱减压法裂解培养细胞实验 实验方法原理通过来自增压舱中的氮气减压膨胀来破碎细胞是一种快速、有效的细胞和组织的匀浆方法，能释放完整的细胞器和制备细胞膜。该方法的原理很简单：细胞放在一个压力舱中，在高压下（约5500kPa，相当于800psi)氮气首先被溶解在细胞中，当压力突然消失时，氮从溶液中迅速气化，并引起细胞膜的拉伸和扩展 核提取物的制备实验（一） 从培养细胞中分离的细胞核制备成的提取物在体外转录和mRNA加工中具有精确的功能，（1）纯化蛋白质（2）核提取物。实验方法原理通过向某些蛋白质溶液中加入某些无机盐溶液后，可以降低蛋白质的溶解度，使蛋白质凝聚而从溶液中析出,这种作用叫作盐析，是物理变化，可复原。对于特定的蛋白质，影响蛋白质盐析的主要因素 结肠直肠肿瘤细胞的培养 通常用酶消化腺瘤，用手术刀片将癌组织切碎。如果分化良好的结肠直肠癌标本切开后仍不易分离细胞，可用酶消化方法分离。实验方法原理通常用酶消化腺瘤，用手术刀片将癌组织切碎。如果分化良好的结肠直肠癌标本切开后仍不易分离细胞，可用酶消化方法分离。实验材料用于传代培养的Dispase试剂、试剂盒生长培养液洗液消 小鼠肝细胞培养实验 实验方法原理 直接从生物体内获取组织细胞进行的首次培养称为原代细胞培养。原代培养是建立各种细胞系的第一步，是从事培养工作的人员应熟悉和掌握的最基本的技术。根据培养方法不同分为组织块培 小鼠肝细胞培养实验——细胞培养技术 实验方法原理直接从生物体内获取组织细胞进行的首次培养称为原代细胞培养。原代培养是建立各种细胞系的第一步，是从事培养工作的人员应熟悉和掌握的最基本的技术。根据培养方法不同分为组织块培养法和单层细胞培养法。实验材料小鼠试剂、试剂盒DMEMDMEM胰酶PBS仪器、耗材饭盒纱布小剪子小镊子大镊子大烧杯平皿研 赛默飞世尔科技中国上海工厂细胞培养类产品产能扩增 尊敬的客户： 为了使赛默飞世尔科技Thermo Scientific NUNC细胞培养类产品更好地服务全球客户，赛默飞世尔科技已经增加了该类产品在中国上海工厂的生产能力。这一全球产能的扩增能够使我们更好满足全世界范围内日益增加的对于Thermo Scientific NUNC细胞培养产品的需求 重组的果蝇 NAP－1 的表达和纯化实验1 实验材料晚对数期的悬浮培养的SFP细胞试剂、试剂盒高滴度的 His－NAP－1 杆状病毒储液（Orbigen）磷酸缓冲盐溶液（PBS）裂解缓冲液 H洗涤缓冲液 H洗脱缓冲液 HHEGD 缓冲液NAP－1 纯化缓冲液 Ni－NTA牛血清白蛋白（BSA）标准乙醇液氮仪器、耗材离心机Wheaton 杜恩斯 表达蛋白检测实验 实验方法原理 当重组病毒通过噬斑纯化和扩增后，免疫印迹可用于鉴定重组蛋白，并检测其是否有预期的大小以及是否从感染细胞中分泌。下面的步骤是介绍检测非分泌性（细胞内）蛋白的，如果重组蛋白是分泌到培养基中的，可按注解中的步骤操作。实验材料 生长至汇片的单层 BS-C-1 细胞重组痘苗病毒储液试剂、试剂盒 旋转瓶培养 实验方法原理 将细胞悬液加入到圆形培养瓶中，然后将培养瓶放在旋转架上缓慢转动。实验材料 D-PBSA0.25%天然胰蛋白酶单层细胞二氧化碳仪器、耗材 培养液和培养液容器旋转培养瓶血细胞计数板或电子细胞计数器和计数用液体旋转架实验步骤 1. 用胰蛋白酶消化细胞，以通常密度种植。旋转瓶中的气相较大， 消除微生物污染 实验方法原理通过冲洗单层培养物或通过离心重悬非贴壁细胞，以高浓度抗生素清洗培养物数次，然后将培养物传代，用加抗生素的培养基传三次，再用不加抗生素的培养基传三次，每次传代后都要检测是否污染。实验材料DBSS试剂、试剂盒高浓度抗生素培养液仪器、耗材用于传代培养的材料带有40×或60×物镜的相差显微镜用于 核提取物的制备实验 实验材料哺乳动物试剂、试剂盒PBS低渗缓冲液低盐缓冲液透析缓冲液仪器、耗材转子离心机电导计透析膜匀浆机离心管实验步骤 1a. 收集转瓶培养的细胞：将浓度为5~10×108细胞/l 的培养液用1 L 的塑料瓶1 850 g 离心20 min，将细胞收入5 细胞增殖生长方面实验 细胞计数法 细胞分裂指数法 接种存活率和克隆形成率法 流式细胞仪检测细胞周期时相和DNA合成法
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