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cDNA AMPLIFICATION FROM LAMBDA-PHAGE LIBRARY_实验方法_丁⾹通
2024-04-27
PREPARE SOLUTIONS 1. SM buffer (1 L): Mix 5.8 g of NaCl, 2 g of MgSO4 -7H2 O, 50 mL of 1M Tris-HCl, pH 7.5, 0.5 mL of 2% gelatin, and dH2 O to 1 L (Autoclave) 2. TENS buffer (100 mL): Mix 5 mL of 1M Tris-HCl, pH 8.0 (50mM), 20 mL of 0.5 mM EDTA (100mM), 2 mL of 5M NaCl (100mM), 3 mL 10% SDS (0.3%), and 71 mL of dH2 O PROCEDURE 1. Plate cells and phage as described (144. cDNA library screening) and let plaques develop 2. Pippet enough SM buffer on plates to barely cover the plate and rock at 4o C for 1 hour 3. Pippet solution containing phage into a tube and add 0.2 mL of 2M ZnCl2 per 10 mL of SM solution4. Centrifuge for 5 minutes at 5,000 rpms. A gray pellet forms 5. Resuspend pellet in TENS buffer 6. Heat at 65o C for 10 mins 7. Extract with phenol followed by chloroform:isoamyl alcohol 8. Precipitate with isopropanol:sodium acetate9. Wash pellet with 70% ethanol 10. Resuspend pellet in T1 E0.1 , check DNA concentration and store aliquoted at -20o C超方便的实验干货查询工具 微信扫码进入「丁香实验」小程序 查看全部 来源：互联网 超方便的实验干货查询工具微信扫码进入「丁香实验」 知道了 你可能喜欢 RNA干扰的详细实验步骤
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