microRNA靶基因验证实验　

当前，microRNA对靶基因的功能研究十分热门。利用荧光素酶报告基因检测实验寻找或验证microRNA对靶点作用性是不可或缺的实验技术。英拜生物可为您提供microRNA报告基因载体构建服务，并可进一步为您提供荧光素酶报告基因检测实验服务。您只需要提供目的microRNA靶位点序列，本公司专业技术服务人员就可替您完成载体构建，为您节省大量的时间和精力。
下图为microRNA-reporter载体表达框架示意图，具有多克隆位点，方便插入目的靶点序列。psiCHECK-2载体用于终点法的细胞裂解物检测，包含萤火虫荧光素酶基因，使海肾荧光素酶的表达水平归一化，令该系统更可靠、重现性更好。使用psiCHECK-2载体时，无须通过共转染进行归一化。
        

1. microRNA靶点的预测

1. 获得microRNA靶点序列

1. microRNA靶序列克隆

1. 阳性克隆鉴定。

1. 细胞转染准备

1. 荧光素酶检测

1. 突变实验

1. 整理分析数据，得出结论。

 MicroRNA功能学实验

• 细胞增殖试验
• 细胞凋亡试验
• 细胞周期试验
• 细胞侵袭试验
• 细胞迁移试验

服务流程：

构建过表达microRNA载体以及对照载体或客户提供人工合成寡核苷酸→转染细胞系→qRT-PCR检测目的MicroRNA前体的表达情况→分析目的MicroRNA与细胞增殖、细胞凋亡、细胞周期、细胞侵袭、细胞迁移之间的调控关系→出具书面报告，qRT-PCR分析的原始数据

客户提供：

MicroRNA前体（Ambion公司）或mimic与寡核苷酸（即对照前体或controlmimic）及细胞系。

公司提供：

MicroRNA表达载体的质粒、质粒测序图、qRT-PCR分析的原始数据、结果分析的书面报告。

 

miRNA表达检测

       定量检测组织或细胞样本中的miRNA是功能研究的第一步，有助于人们进一步了解miRNA与疾病发生及发展的关系，以便为疾病的早期诊断提供新的思路。本公司主要通过microRNA芯片、microRNA-Seq、microRNAPCR芯片、实时定量PCR、原位杂交等多种方法检测miRNA的表达情况。为您提供最优质的、全方位的技术服务。

1、microRNA芯片检测服务http://www.biomart.cn/infosupply/7484330.htm

2、 microRNAPCR芯片检测服务http://www.biomart.cn/infosupply/10966567.htm

3、microRNA-Seq检测服务http://www.biomart.cn/infosupply/9632788.htm

4、microRNA定量PCRhttp://www.biomart.cn/infosupply/7484332.htm

miRNA芯片，microRNA-Seq数据深度发掘分析

a)芯片，测序数据聚类分析

b)microRNA靶基因预测“TargetScanS”，“miRanda(miRBase)”，“miRGen”等数据库

预测差异microRNA的所有靶基因。

c)靶基因GO分析

根据GeneOntology数据库对靶基因进行功能显著分析，从而筛选显著性功能的靶基因。

d)靶基因pathway分析

根据KEGG数据库对靶基因进行Pathway分类，并进行显著性分析从而得到显著性的Pathway分类。

e) 构建的MicroRNA与基因的调控网络

通过构建MicroRNA与基因的调控网络，可以从中找出hub基因及hubmicroRNA.

f) microRNA、靶基因、转录因子调控网络

microRNA也会受到转录因子调控造成表达差异，通过系统研究转录因子与基因间的调控关系，可以为寻找重要转录因子及重要基因提供线索。

g)microRNA启动子分析及甲基化位点分析

当microRNA研究日趋火热，越来越多的研究者开始关注microRNA本身甲基化变化。MicroRNA基因的甲基化变化也是造成microRNA表达差异的重要原因。