基因敲减慢病毒稳转细胞株 (LentiKDStable)
| 提供商： | 上海麒盟生物 |
| 服务名称： | 基因敲减慢病毒稳转细胞株(LentiKD-Stable) |
慢病毒是将含基因的载体转入大部分哺乳动物细胞最有效的工具，转导的慢病毒载体携带基因可以和细胞基因组DNA整合，从而稳定，长期对基因水平进行调控。通过一套高效的高滴度慢病毒生产系统，能应用于大规模慢病毒生产。病毒滴度可高达10E8-E9TU/ML。利用不同的腺病毒载体系统可分别适用于在各类细胞中稳定过量表达、敲减和敲除不同大小的外源基因。
同时，由于大多数公司只销售体外构建的慢病毒，然而由于细胞异质性，往往在用户进行后续细胞实验过程中不能达到感染效率和预期基因表达水平改变。为简便用户在使用慢病毒筛选细胞稳转株时的繁琐过程，以及保障在不同细胞株中具有确定感染和基因改变效率，推出一站式慢病毒稳转细胞株筛选构建服务，针对用户需要进行功能实验的细胞，通过慢病毒载体上的G418或puromycin抗性进行慢病毒稳转细胞株筛选。用户在60-90天内可直接拿到经过表达鉴定的相应慢病毒稳转细胞株。可以广泛用于癌症、肿瘤、代谢性疾病等相关机制研究。
基因敲减慢病毒稳转细胞株(LentiKD-Stable)
用于下调基因的高纯度慢病毒进行特定稳转细胞株筛选，适用于在各类细胞中稳定抑制同源基因的表达。
LentiKD-Stable敲减稳转株
1. 选择至少3个不同的靶点，设计shRNAs
2. 合成对应的序列并构建表达载体
3. 后续慢病毒感染细胞及筛选，步骤基本与LentiOE-Stable相同
4. 注意事项
1）单克隆分析前需要筛选出干扰效率最高的siRNA。经抗药基因初步筛选后，提取RNA以qPCR检测目的基因干扰效率。
2）筛选出的siRNA再进行单克隆分析，以qPCR检测筛选出干扰率最高的稳转株，再以WB鉴定选出敲减效果最好的稳转株。
3）需关注细胞存活率和生长状态。某些基因敲减会造成生长缓慢或者致死表型，因此药物筛选会有影响，需要将细胞以低密度种板进行单克隆筛选，或者可选择FACS分选表达GFP的细胞再分析。也可选择可诱导型RNAi表达载体。
服务优势
拥有成熟稳定的稳转细胞系筛选平台，技术多样化，并且可以结合客户特殊需求，灵活地定制服务。稳转细胞株无细菌、真菌及支原体污染，其生长状态、活率及目的蛋白表达水平至少20代保持稳定。
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发布于 ： 2021-09-10
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