Chromosomal DNA Isolation
来自 : 蚂蚁淘
ChromosomalDNAIsolationMETHOD:- Growcellsin2-5mlbrothtolatelogphase.
- Pellet1-2mlcellsinmicrofuge.
- ResUSPendcellsin400µlTES(50mMTris-HCl,10mMNaCl,10mMEDTA,pH7.5).
- Add:17µl30%(w/v)sarkosyl(finalconcentrationof1%)and5µl10mg/mlproteinaseK(finalconcentration100µg/ml).
- Incubateat37ºCfor30-60minutes,oruntilthesolutionclears.
- Add400µl4MNH4OAcandmixwell.
- Extract2Xwith1:1phenol:chloroform.
- Extract1Xwithchloroform.
- PrecipitatewithanequalvolumeofisopropanolatRTfor10minutes.
- Resuspendpelletin400µl0.1MNaOAcpH6.0.Pelletmaynotresuspendcompletely.ReprecipitateDNAwith800µlEtOHfor15minutesatRT.
- Centrifugeat11Kfor15minutestopelletDNA.
- Rinsepelletin1ml70%EtOHfor5minutes.
- Drypelletbyplacingopentubein37Cincubatororonbenchtopfor15-20minutes.
- ResuspendDNAin50ulTE(10mMTrispH8.0,0.1mMEDTA)overnightat4C.Mayadd1µlRNasetohelpDNAdissolve.Yields25-50ugofDNA;use1-5µlperdigest.
TES:5.0ml1MTrispH7.50.2ml5MNaCl2.0ml0.5MEDTA93mlsterileMQwater
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