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Passaging cells
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Passagingcells

  1. Pouroutmediafromflasks.
  2. WashwithHanks.5mlperflask.
  3. Tiltaroundthendump.
  4. Add4mlofTrypsin/EDTAtoeachflask.Tip,thenbang.
  5. Add20%FBSNCTCmediaandtilt.4mlperflask.
  6. Scrape(mostofthesmallcellsarealreadyreleased;proliferativecellsliftupeasy,differentiativecellsaremoreadherent).
  7. Placecontentsintoa50mlFalcontube.
  8. Spinat1000RPMfor5min(#5setting=1000)
  9. Dumpoffsupernatant.
  10. Addenoughmediatoallow2mlofcellsperflask(RCHO-cellsstarttodifferentiateatdaytwo.Atthattimeaflaskcontainsca.1millioncells.Theyarespreadby1:3).
  11. Eachflaskshouldhave8(or10)mlof20%FBSNCTCmedia+2mlofcellsforatotalof10(or12)ml.

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