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enogene/EnoGeneFec™ 2000 Transfection Reagent/1000μl/EGF2000-1000
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品牌 / 
enogene
货号 / 
EGF2000-1000
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EnoGeneFec™ 2000 Transfection ReagentPDF

  • Catalog Number:

    EGF2000-1000
  • Amount:

    1000μl
  • Storage/Stability:

    and stabilityEnoGeneFec™ 2000 Transfection Reagent is provided in 1μg/μL concentration. It is shipped at room temperature and is stabilized for extended storage at +4°C for one year when very tightly closed.产品介绍EnoGene新推出的EnoGeneFec™ 转染试剂以最高的转染效率、使用方便、细胞毒性小、生物可降解为设计宗旨,EnoGene的新型配方克服了常见的阳离子或脂质体转染试剂带来的细胞毒性作用,更适合做长效和瞬时转染。使用这种新的转染试剂操作方便,可用于转染质粒、线性双链DNA、反义寡核苷酸及RNAi等,在实际使用中获得了非常理想的效果。EnoGeneFec™ 2000是针对贴壁细胞设计的转染试剂,可用于体外转染质粒、线性双链DNA、反义寡核苷酸及RNAi等。对常用的贴壁细胞转染效率可达80%以上。EnoGeneFec™ 2000可以形成微小的(平均大小约100-400nm)单层脂质体,靠静电作用结合到DNA的磷酸骨架上以及带负电的细胞膜表面,并与寡核苷酸等能形成稳定的较小的纳米胶体颗粒,通过细胞"内吞作用"进入细胞,能吸收溶酶体的H+,在复合体中形成酸性环境使核酸酶失活,保护DNA免受核酸酶的降解。进入细胞后,复合体囊泡肿胀破裂,将DNA释放到细胞质中,实现基因转染。EnoGeneFec™ 2000与其他转染试剂相比无论在转染效果和实验操作上都有明显的优势,主要表现为:●转染效率很高,对大多数贴壁细胞使用效果综合评价明显高于其它常用转染试剂●细胞毒性低,需要转染较大剂量的DNA时,毒性明显低于其它常用转染试剂●操作简单,以最短的时间完成转染,转染试剂-DNA复合物的形成时间只需20min试剂盒组分组分EnoGeneFec™ 2000 Transfection ReagentEGF2000-5000.5mlEGF2000-10001mlEGF2000-15001.5ml操作步骤(以6孔板为例)转染前18-24小时使用完全培养基在6孔细胞培养板,每孔接种2ml 细胞培液(根据细胞培养条件,可含血清及抗生素),约为1-3×105个细胞,转染前细胞密度应达到70-90%。若使用其他的培养板或培养皿,可以参照下表中提供的孔(或皿)表面积和体积相应的调整细胞接种数、EnoGeneFec™ 2000加量。培养板表面积(cm2/孔or皿)可容纳培养基体积(ml/孔or皿)DNA(或其他核苷酸类成分)用量(µg)EnoGeneFec™ 2000用量待加的无血清、无抗生素的培养基体积96孔0.30.1-0.20.2μg溶于 20 μl 培养基0.4-1.0 μl 溶于 20 μl培养基50μl24孔20.5(0.2-)1 μg溶于 25 μl 培养基2-5 μl 溶于 25 μl培养基0.4ml12孔41.0(0.5-)2.0 μg溶于 100 μl培养基4-10 μl 溶于 100 μl培养基0.6ml6孔102.0(1.0-)5.0 μg溶于 100 μl培养基10-25 μl 溶于 100 μl培养基0.8ml35 mm102.0(1.0-)5.0 μg溶于 100 μl培养基10-25μl 溶于 100 μl培养基0.8ml60mm205ml(3.0-)10.0μg 溶于 500 μl培养基20-50μl 溶于 500 μl培养基2.4ml10-cm6010ml(8.0-)20.0 μg 溶于 1.5ml培养基40-100μl 溶于 800μl培养基6.4ml2. 转染复合物的制备:溶液A:将5µg 质粒DNA(或其他核苷酸类成分)加入到100μl无血清、无抗生素的培养基,在1.5ml无菌EP管中混匀后,室温放置5分钟。溶液B:EnoGeneFec™ 2000在使用前请震荡混匀。将10-25µl EnoGeneFec™ 2000加入到100μl 无血清、无抗生素的培养基中,在1.5ml无菌EP管中混匀,室温放置5分钟。将溶液A加入到溶液B中,轻轻混匀,室温放置20分钟,获得约200μl转染复合物 (注:该转染复合物在室温下5小时内是稳定的)。3. 将800μl 无血清、无抗生素的培养基加入到上述的200μl转染复合物中,轻轻混匀,获得约1.0ml转染复合物溶液。4. 将培养板中的培养基弃去,将第3步获得的1.0ml转染复合物溶液加入到培养孔中覆盖细胞。5. 于5-8小时后,弃去每孔中的转染复合物溶液,加入2.0ml完全培养基(根据细胞培养条件,可含血清及抗生素),37℃孵育转染细胞18-24小时6. 收集细胞用于分析。如要建立稳定转染,于转染24小时后将细胞按1:10传代至新鲜培养基中(根据细胞培养条件,可含血清及抗生素),传代次日可以换用选择培养基。注意事项1.质粒DNA的质量使用高纯度的质粒DNA也是转染试验中的关键因素。为了保证试验的结果,建议对提取的质粒DNA的量和纯度进行检测。DNA含量(μg/mL)=50×(260 nm的读数)×稀释倍数,另外通过检测质粒DNA在260nm和280nm的OD值的比值(OD260/OD280)估计核酸的纯度,OD260/OD280=1.8说明DNA样本纯度较高。2. 转染细胞的要求细胞的传代次数是影响转染效果的重要因素,推荐使用在50代以内的细胞进行转染试验。要求在转染前24小时对细胞再次传代。3. 血清的影响。在EnoGeneFec™ 2000和DNA形成转染复合物的过程中不能添加血清。4. EnoGeneFec™ 2000的用量为了达到更高的转染效率,对于接种细胞密度在70%-90%之间的样本,可通过预试验在EnoGeneFec™ 2000(μl )∶DNA(μg )=1∶1 - 5∶1之间选择最佳的比例。EnoGeneFec™ 2000(μl)∶DNA(μg)的推荐比例为2∶1或5:1。对于一般细胞,2:1即可获得理想转染效果;对于较难转染的细胞,建议使用5:1。五、储存EnoGeneFec™ 2000以1 μg/μl浓度液体形式提供,保存在4℃。常温运输。保存期:一年
  • Price:

    220$
  • Research Area:

    Stem Cells Cancer Cardiovascular Cell Biology Epigenetics & Nuclear Signaling Developmental Biologys Immunology Drug Discovery Products Metabolism Neuroscience Signal Transduction

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ORGANOTYPIC KIDNEY CULTURES -embryos are dissected from timed-pregnant mice from 11.5 d.p.c. to 13.5 d.p.c. -metanephroi and associated ureteric buds are micro 查看更多>
北京泰泽瑞达科技有限公司在发布的CellBanker2细胞冻存液供应信息,浏览与CellBanker2细胞冻存液相关的产品或在搜索更多与CellBanker2细胞冻存液相关的内容。 查看更多>
菌株分离(separation)就是将一个混杂着各种微生物的样品通过分离技术区分开,并按照实际要求和菌株的特性采取迅速、准确、有效的方法对他们进行分离、筛选,进而得到所需微生物的过程 查看更多>
冻存和复苏的原则:慢冻快融当细胞冷到零度以下,可以产生以下变化:细胞器脱水,细胞中可溶性物质浓度升高,并在细胞内形成冰晶。如果缓慢冷冻,可使细胞逐步脱水,细胞内不致产生大的冰晶;相反,结晶就大,大结晶会造成细胞膜、纲胞器的损伤和破裂。复苏过程应快融,目的是防止小冰晶形成大冰晶,即冰晶的重结晶。慢冻程序1. 标准程序:采用细胞冻存器当温度在-25 ℃以上时, 1~2 ℃/min;当温度达-25 ℃以下时, 5~10 ℃/min;当温度 查看更多>
细胞冻存液 含血清不含DMSO 查看更多>
Tissue Culture Media We use two different kinds of media. Most cells are grown in DMEM. A few lymphoid cell lines are grown in RPMI. Cells grown in DMEM must b 查看更多>
小生刚开始做细胞培养不久,对于一个细胞培养的新手来说,最怕的就是细胞受污染。所以本人翻阅了一些园子里的关于细胞培养过程中的污染问题的贴子,结合平时查阅资料以及这些天的细胞培养的一些心得,整理出一些关于细胞污染的东东与大家一起分享。希望能对刚踏入细胞培养的同仁们有些帮助,也希望各位达人作出补充,大家共同进步。 概述 凡混入细胞培养环境 查看更多>
赛业(广州)生物科技有限公司在发布的间质干细胞无蛋白非程序冻存液供应信息,浏览与间质干细胞无蛋白非程序冻存液相关的产品或在搜索更多与间质干细胞无蛋白非程序冻存液相关的内容。 查看更多>
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菌种保存和微生物常识1、常用培养基的制备、灭菌与消毒 营养:从外部环境摄取其生命活动所必需的能量和物质,满足生长和繁殖需要的一种生理过程。是生命活动的物质基础,是生命活动 查看更多>
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本人要做ELISPOT,急求1、进口淋巴细胞分离液,Lymphoprep或者NycoPrep1.077(无寡糖)2、DiacloneELISPOT配套试剂盒,3、荷兰U-CyTech公司推出的冻存液,专门针对做ELISPOT检测的专门针对于人的PBMC细胞的ELISPOT血清培养基。各位高手帮帮忙,请指点如何买到上述产品,有相关联系电话更好.多谢!联系方式:zhangxy724@163.com。

最近打算做PDX,成瘤后想冻一些组织,求推荐试剂盒,最好能说下价格?还有就是必须要在液氮中吗,-80行不行?

(转载,仅供参考)
1. 37℃水浴预热培养液(HUVEC-004)。
2. 从液氮中取出HUVEC的细胞管,快速将其置入37℃水浴中解冻,直到管中只剩下最后一片结晶(注意:不要让水没过产品管)。 用75%的酒精擦拭产品管外壁。
3. 将HUVEC的细胞管中的细胞移至15ml无菌离心管中,慢慢逐滴加入预温的37℃ 基础培养液(HUVEC-004B)培养液4-5ml混匀,边加边摇匀。
4. 用1ml的培养液冲洗HUVEC的细胞管,向15ml离心管中加入冲洗的细胞悬液,边滴加边摇匀。
5. 取10μl细胞悬液和10μl台盼蓝混匀后,取10μl计数。
这一步骤非常重要,能确定您收到的产品是否合格(详见如何计数复苏的细胞)
6. HUVEC的细胞悬液在1500rpm,室温条件下,离心10分钟,去除上清。
7. 加HUVEC完全培养液4-5ml, 轻轻混匀细胞,备用。
8. 接种前将 T25培养瓶中的包被液吸去,按2500-5000个细胞/cm2接种细胞。(1支冷冻的细胞可以种一瓶T25培养瓶)

9. 每个HUVEC的细胞培养瓶中加完全培养液(HUVEC-004)3-5ml, 后置于37℃、5%CO2 培养箱内培养。
这个问题由武汉新启迪生物来为您解答。
做ELISA实验,在处理样本前应该先了解收集样本的注意事项。
【标本收集注意事项】
1.收集血液的试管应为一次性的无热原,无内毒素试管。
2.血清和血浆避免使用溶血,高血脂标本。
3.标本应清澈透明,悬浮物应离心去除。
4.标本收集后若不及时检测,需按一次使用量分装,冻存于-20℃,-80℃电冰箱内,避免反复冻融。
5.可根据标本的实际情况,做适当倍数稀释(建议做预实验,以确定稀释倍数) 。
6.收集标本,尽量做到双份的用量,避免一次实验失败,重复实验时标本缺失,从而耽误实验进程。
7.收集标本时,应该做好防护措施(比如戴手套,口罩,护目镜等),认为所有标本都具有一定的潜在危险性。
8.样本处理应该在生物安全柜里面,并且正确使用生物安全柜。

样本正确的处理方法应该是这样的:
【标本处理办法】
1.血清:将采集的全血静置冰箱4℃过夜,然后1000-3000rpm离心10分钟,取上清立即测试,暂时不测可以放入-20℃(1-3个月)或-80℃(3-6个月)保存。
2.血浆:用EDTA,枸橼酸钠,肝素等作为抗凝剂,加入血液混匀后,1000-3000rpm离
心10分钟,取上清立即测试,暂时不测可以放入-20℃(1-3个月)或-80℃(3-6个月)
保存。
3.组织匀浆:切取组织块,0.01MPBS中过洗一次;按照1G组织加入5-10ml组织蛋白萃取试剂的比例,在冰水中匀浆。匀浆完成后,5000-10000rpm离心10分钟,取上清立即测试,暂时不测可以放入-20℃(1-3个月)或-80℃(3-6个月)保存。
4.细胞培养上清:1000-3000rpm离心10分钟,取上清立即测试,暂时不测可以放入-20℃(1-3个月)或-80℃(3-6个月)保存。
5.尿液,腹水,脑脊液等:1000-3000rpm离心10分钟,取上清立即测试,暂时不测可以放入-20℃(1-3个月)或-80℃3-6个月)保存。

注:样品稀释的一般原则
用户须查阅相关文献了解标本内待测因子的含量,决定适当的稀释倍数,以使稀释后样品中待测因子的浓度处于ELISA试剂盒的最佳检测范围。样品的稀释应有详细记录。

希望可以给您提供帮助,祝您科研顺利!
只有医院生殖中心和精子库才有资格做吧,自己好像不允许也没那个条件

各位大神们,我的课题实验需要提取临床患者抗凝外周血的血浆进行冻存和后续研究,由于血样珍贵,老板让我把离心提取血浆之后所剩的沉淀也加以利用,从剩下的沉淀(血细胞)当中提取出白细胞并冻存,用于之后做western。我用自己的外周血标本试做了一下,5mlEDTA抗凝外周血,3000rpm4℃离心10min后,取上层血浆分装-80冻存用于相关ELAISA实验,然后在下层沉淀(血细胞)中加入3倍体积的溶血剂,静置10min使红细胞裂解之后离心,结果并没有明显的分层,我重复了加溶血剂裂解红细胞并离心的步骤,到最后的结果还是只能达到如图所示。可以看到一层灰白色物质,但无法完全分离提取白细胞,所以想请教各位大神:①我的操作中有哪些错误烦请大家指出;②我用的溶血剂是OptilyseC的溶血剂,是否是试剂的问题?是否需要购买专门的红细胞裂解液,或者自行配制?③为什么裂解红细胞之后分层并不明显,多次离心之后还是分不清楚?④如果可以提取出白细胞,是否可以直接加入冻存液将白细胞-80℃冻存用于之后的研究(主要是Western,不影响细胞内蛋白即可)?因为是第一次做实验,血样珍贵,这种处理方法做过的人也很少,烦请有经验的各位批评指正,向大家虚心请教学习,不胜感激!


本研究是一单基因遗传病的基因连锁定位及突变分析,现采集了外周血标本冻存(已分离出血浆,血细胞冻存-80度),择期拟提取基因组DNA做连锁分析,请问各位同道:用哪个公司的DNA试剂盒最好,谢谢!
二甲基亚砜是一种重要的渗透型细胞保护剂。在深低温(零下200度)保存细胞时冻存过程中,为防止细胞内液冰晶形成、渗透压改变、细胞结构紊乱等导致的损
伤,有必要使用含有DMSO冷冻保护剂。 DMSO能够快速穿透细胞膜进入细胞中,降低冰点、延缓冻存过程, 同时提高细胞内离子浓度,
减少细胞内冰晶的形成,从而减少细胞损伤。深低温时二甲基亚砜的细胞毒性受到抑制。复苏时动作要快,尽快洗掉二甲基亚砜,否则会造成对细胞严重的毒性。二
甲基亚砜(DMSO)是目前最好的细胞冻存保护剂,但也是一种以细胞毒性很大的化学试验剂。研究结果表明,培养液中DMSO浓度为10%时,细胞生长抑制
率近100%;1‰浓度时抑制率为35%,即使是0.04‰的浓度,DMSO对细胞的生长也有不利的影响。
ELISA实验中血清的采集、处理和保存; 1、 真空采血针采集2ml新鲜血液,加入无菌试管中; 2、 采血后室温静置1小时; 3、 将采集血液用离心机4℃,2500rpm离心10min,,将离心好的匀浆留上清,弃下面沉淀ELISA实验中血浆的采集、处理和保存; 1、 真空采血针采集2ml新鲜血液,加入无菌试管中; 2、 按1:9加入抗凝剂(EDTA、草酸钠、肝素、枸橼酸钠),30分钟内于冰上分离血浆以 减少血小板的污染;(也可以直接用抗凝管采集); 3、 将采集血液用离心机4℃,2500rpm离心5min,,将离心好的匀浆留上清,弃下面沉淀。 4、 取上清。 分装冻存备用,
使用了可靠有效的保护剂恰当冻存的细胞可永远保存在液氮中而保持活力。至少已证明的历史有30-50年了。不管是在液态液氮中,还是在液氮的气相中,过了几十年细胞活力没有明显下降。
  但在干冰或-70℃冰箱中保存的细胞,活力下降很快,当然细胞与细胞之间敏感性不同。有实验验证保存在-70℃冰箱中的细胞6个月后活力损失超过50%。ATCC证明在干冰中人类细胞4个月活力损失殆尽,小鼠的细胞可到6个月。
无菌实验室的管理要求123
二十四面怪人2021-07-28
您好,我是一个刚刚考上研究生的研一狗,导师要安排我管理一个实验室,我却完全没有任何头绪进行管理,恳请帮助,急!!!
在冻存前一天最好换一次培养液。
细胞冻存是细胞保存的主要方法之一。利用冻存技术将细胞置于-196℃液氮中低温保存,可以使细胞暂时脱离生长状态而将其细胞特性保存起来,这样在需要的时候再复苏细胞用于实验。而且适度地保存一定量的细胞,可以防止因正在培养的细胞被污染或其他意外事件而使细胞丢种,起到了细胞保种的作用。除此之外,还可以利用细胞冻存的形式来购买、寄赠、交换和运送某些细胞。 细胞冻存时向培养基中加入保护剂--终浓度5%.15%的甘油或二甲基亚砜(DMSO),可使溶液冰点降低,加之在缓慢冻结条件下,细胞内水分透出,减少了冰晶形成,从而避免细胞损伤。 采用"慢冻快融"的方法能较好地保证细胞存活。标准冷冻速度开始为-1 到 -2℃/min,当温度低于-25℃时可加速,到-80℃之后可直接投入液氮内(-196℃)。