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CLODRONATE LIPOSOMES & CONTROL LIPOSOMES (PBS)
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CLODRONATE LIPOSOMES & CONTROL LIPOSOMES (PBS)

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Description

Liposomalformulations

Clodronateliposomes:

ArtificialspheresconsistingofconcentricphospholipidbilayersencapsulatinganaqueousPBS(phosphatebufferedsaline)solutioncontainingclodronate.Liposomesareparticles,sizedatamax.of3micron.TheyareformingasUSPensioninPBSandwilltendtoprecipitateuponstorage,formingapelletonthebottomofthetubeorflask.ThesuspensionshouldbeshakenbeforeadmiNISTrationtolaboratoryanimalsinordertorecoverthehomogeneoussuspension.

Controlliposomes(PBS):

Controlliposomesdonotcontainclodronate.ContainingPBSonly,theycanbeusedforcontrolexperiments,inordertofindoutwhethertheeffectsobservedafterinjectionofclodronateliposomesareduetomacrophagedepletionexclusively.

人造球体由同心磷脂双层组成,其包封含有氯膦酸盐的含水PBS(磷酸盐缓冲盐水)溶液。脂质体是颗粒,大小最大。3微米。它们在PBS中形成悬浮液,并且在储存时倾向于沉淀,在管或烧瓶的底部形成颗粒。在给予实验动物之前应该摇动悬浮液以回收均匀的悬浮液。


对照脂质体(PBS):

对照脂质体不含氯膦酸盐。仅含有PBS,它们可用于对照实验,以确定注射氯膦酸盐脂质体后观察到的效果是否仅由于巨噬细胞耗竭。

Additionalinformation

Weight0,2kg
Quantity

5ml(5mlClodronateLiposomes),10ml(10mlClodronateLiposomes),15ml(15mlClodronateLiposomes),20ml(20mlClodronateLiposomes),25ml(25mlClodronateLiposomes),30ml(30mlClodronateLiposomes),40ml(40mlClodronateLiposomes),50ml(50mlClodronateLiposomes),60ml(60mlClodronateLiposomes),70ml(70mlClodronateLiposomes),80ml(80mlClodronateLiposomes),90ml(90mlClodronateLiposomes),100ml(100mlClodronateLiposomes),150ml(150mlClodronateLiposomes),200ml(200mlClodronateLiposomes),250ml(250mlClodronateLiposomes),300ml(300mlClodronateLiposomes),350ml(350mlClodronateLiposomes),400ml(400mlClodronateLiposomes),450ml(450mlClodronateLiposomes),500ml(500mlClodronateLiposomes)

去除巨噬细胞(depletionofmacrophages)是研究巨噬细胞功能的重要方法。荷兰阿姆斯特丹VrijeUniversity的NicovanRooijen教授开发的一款ClodronateLiposomes,可以利用巨噬细胞的内吞机制,将膜不通透性的氯磷酸(clodronate)带入细胞内,从而达到去除巨噬细胞的目的。作用原理:两亲性磷脂分子在水中可以形成同心圆形式的磷脂双分子层球体,磷脂双分子层中间通过水相分隔。溶解在水溶液中的氯磷酸盐在形成脂质体的过程中被包裹进磷脂双分子层之间的水相中(如图1)。游离的氯磷酸盐不能自由的通过脂质体的磷脂双分子层。随着脂质体被巨噬细胞吞噬,在巨噬细胞溶酶体磷酸酶的作用下,

溶解在脂质体水相中的氯磷酸盐就可以被逐步释放出来,并累积在细胞内,当其达到一定浓度时,巨噬细胞将会受到不可逆转的损伤,从而进入凋亡过程(如图2)。从死亡的巨噬细胞中释放出来的氯磷酸盐在细胞外的半衰期极短(大约15min),可以通过泌尿系统排除体外。

1氯磷酸-脂质体Clodronateliposomes复合物。在脂质体的形成过程中氯磷酸通过溶解在水溶液中被包裹进磷脂双分子层之间的水相中。

2巨噬细胞清除原理。包裹着氯磷酸(方块)的脂质体通过巨噬细胞的内吞作用进入细胞,与溶酶体(L)融合后,在磷脂酶(箭头)的作用下,释放出氯磷酸,当细胞内氯磷酸的浓度达到一定浓度,就会对巨噬细胞造成不可逆转的损害,从而迫使其进入细胞凋亡产品性质:1ml脂质体体悬液中所含的氯磷酸大约为5mg。所用的磷酸盐缓冲液为10mMNa2HPO4,10mMNaH2PO4,140mMNaCl。脂质体体内注射:隔日尾静脉注射200μlclodronateliposome,根据实验要求制定注射日程。通过免疫组化或流式检测巨噬细胞去除效率。尾静脉注射方法:(1)将小鼠放在倒扣的饭盒内,从孔口拉出尾巴,小鼠的尾部有2条动脉和3条静脉,2条动脉分别在尾部的背侧面和腹侧面,3条静脉呈品字型分布,一般采用左右两侧的静脉;(2)将纱布浸泡于约70度的温水中,拿出后包裹尾巴,以达到使尾部血管扩张及软化表皮角质的目的;(3)行尾部静脉注射时,以左手拇指和食指前后摁住鼠尾,留出约2cm一段,使皮肤紧张,静脉更为充盈,右手持1ml针头注射器,使针头与静脉平行(小于30°角),从尾巴的下1/4处进针,开始注入药物时应缓慢,仔细观察,如果无阻力,无白色皮丘出现,说明已刺入血管,可正式注入药物。(4)有的实验需连日反复尾静脉注射给药,注射部位应尽可能从尾端开始,按次序向尾根部移动,更换血管位置注射给药。拔出针头后,用棉球按住注射部位轻压1-2min,止血。效果展示:案例一:案例二:

左图显示的是正常脾脏细胞中阳性巨噬细胞的染色结果。右图为clodronate-liposome注射2天后观察的结果,可以发现只剩下少量的巨噬细胞。左图表示正常肝脏细胞中阳性的Kupffer细胞。右图表示clodronate-liposomes注射2天后,肝脏Kupffer细胞染色结果,Kupffer细胞基本被清除。

FAQ:

Q:收到Clodronateliposomes后该如何操作?A:收到氯磷酸脂质体后,如果不能马上使用,需要放置在4℃冰箱。禁止冻存!使用时作为原液使用,不能进行稀释。脂质体很容易发生沉淀,建议使用之前轻轻混匀,另外4℃的氯磷酸脂质体不能马上使用,需要恢复到室温才能进行注射。

Q:Clodronateliposomes能否用于体外巨噬细胞清除?A:产品可以用于体外巨噬细胞的清除,但是这种方法比较适合体内实验。主要是由于在体外培养过程中,从死亡细胞释放的氯磷酸或者是从脂质体中“渗漏”出来氯磷酸,会一直存在于培养基中,但是在体内,氯磷酸的半衰期很短,很快就会被肾脏清除。虽然游离的氯磷酸不会进入细胞也不会进入脂质体,但是一旦他们在培养基中积累就会慢慢地进入细胞中。

Q:在静脉注射Clodronateliposomes后动物很快就死亡了,是什么原因?A:一方面有可能是动物注射了不均一的脂质体悬液。建议在使用之前轻轻摇晃混匀。脂质体在体外一段时间后会发生沉降。如果在很长一段时间内需要一次注射多只动物,那么脂质体便会在注射器中发生沉淀,形成不均一悬液,这样一来,第一只注射的计量与最后一只注射的计量就会发生明显的变化。另外一方面有可能是脂质体刚从冰箱取出后,没有恢复到室温。

Q:动物在注射Clodronateliposomes后几天就死亡了?A:这个可能是受到细菌的污染,体内清除巨噬细胞后会增加例如病毒粒子,细菌或者酵母感染的几率。

Q:静脉注射Clodronateliposomes后大鼠脾脏/肝脏中的ED1+细胞并没有完全消失?A:大鼠中成熟的巨噬细胞呈现ED1和ED2双阳性,但是有一些没有吞噬功能的或者吞噬作用小的前体细胞也是ED1+,但是呈现ED2-。因此,所有ED2+的细胞都可以被完全清除,但是ED1+的细胞却只能被部分清除,清除的比率取决于前体/成熟巨噬细胞的比例。

Q:Clodronateliposomes没有达到期望的效果?A:氯磷酸脂质体都是大批量的生产,每批次都会对氯磷酸的浓度以及一些可能的污染物进行检测,确保无误后才会销售给客户。另外,脂质体容易收到极端温度的影响。正确的运输和储存方式是4~8℃,悬液既不能被冻存,也不能被加热超过30℃。自收到货物起,需要在3个月内使用完,不然有可能会影响使用的效果。

Q:在静脉注射时,能不能增加注射的体积?A:静脉注射时需要依据动物的体重,不能超过0.1ml/10mg,但是进行腹腔注射可以适当的增加注射的体积。皮下注射需要根据注射位点的容量进行决定。


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    荧光蛋白第一批用于细胞生物学的荧光蛋白包括藻胆蛋白(phycobiliproteins)和从蓝藻(cyanobacteria)中提取的触角光合色素(photosynthetic antenna pigments)。这些生物大分子都含有多种胆汁三烯生色基团(bilin chromophores)。这些生色基团都包裹在一种基质结构中,这样就能将它们的淬灭作用降至最小,因此这些藻胆蛋白的荧光亮度要比小分子荧光染料的亮度高出两个数量级。不过这些藻胆蛋白的“个头(分子量高达200KD)”也限制了它们在细胞内的扩散,因此,它们也只能与抗体联用,在流式细胞术试验或ELISA试验中用来检测细胞表面的蛋白质分子   收起
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    ylgtwcat 2017-10-14
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    目的初步筛选出肝母细胞瘤(HB)中的肿瘤干细胞(NSC)相关表面标记组合,并了解NSC的分布。方法选择入住江西省儿童并接受的HB患儿,采用免疫组织化学染色的方法,观察干细胞相关标记物CD34、Thy-1、c-kit、CD56和干细胞生长因子(SCF),在HB组织及距肿瘤组织边缘3cm以外的正常肝脏组织的表达和分布。结果 Thy-1、c-kit散在分布于HB组织中,主要集中在汇管区,而正常肝脏组织中不表达;CD34及SCF在HB中的表达明显高于正常肝脏组织(P0.05),其中CD34主要在血管内皮系统中分布,SCF主要表达在汇管区;CD56表达于成簇的神经纤维组织中,在HB及正常肝脏组织中表达差   收起
    cn#GLLfkVpLkL 2017-10-12
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    基因工程中标记基因必不可少,基因工程的核心步骤,构建基因表达载体,中用标记基因检测重组质粒是否已经导入受体细胞中,从而区分己导入细胞和未导入细胞。(标记基因通常是抗生素基因。)似乎都是鉴定目的基因是否导入受体细胞 没有鉴定是否成功导入质粒的 鉴定目的基因是否导入受体细胞有四个层次 1 直接鉴定受体细胞中是否有目的基因 用DNA分子杂交 2 鉴定目的基因是否转录 分子杂交(mRNA) 3 目的基因是否表达 抗原-抗体 (蛋白质) 4 看受体细胞发育成的个体是否表现出相关性状   收起
    本回答由网友推荐 2017-10-06
  • Kyoya雀MZ4 2017-10-03
    (1)死/活细胞染色法 : 使用选择性死/活细胞染色的特殊染料如不易穿透活细胞膜的台盼兰、苯胺黑及用于活细胞着色的中性红、健那绿、亚甲蓝、甲苯胺蓝等,通过染色区分死活细胞并计数来间接判断细胞膜通透性的改变情况。该方法简单,方便,价廉;但灵敏度和精确性差。(2)荧光标记法 : 使用二乙酸荧光素(FDP...   显示更多
    (1)死/活细胞染色法 : 使用选择性死/活细胞染色的特殊染料如不易穿透活细胞膜的台盼兰、苯胺黑及用于活细胞着色的中性红、健那绿、亚甲蓝、甲苯胺蓝等,通过染色区分死活细胞并计数来间接判断细胞膜通透性的改变情况。该方法简单,方便,价廉;但灵敏度和精确性差。(2)荧光标记法 : 使用二乙酸荧光素(FDP)、碘化丙啶(PI)或异硫氰酸荧光素钠标记的荧光染料与细胞共孵育,用流式细胞仪检测荧光染色阳性细胞的比率。此法其实是(1)法的“荧光”版,但其在灵敏性和准确性方面明显要优于后者。(3)硝酸镧(La)示踪法: 在正常的生物组织中镧微粒可沉积于细胞间隙,但不能穿过具有1~ 2nm 微小间隙的细胞膜性结构   收起
    一日不见兮01 2017-10-11
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