【求助】超声破碎细菌后菌液无变化
2007-09-28
问题描述：
我用pET28a作载体，转化E.coliBL21。诱导400mL菌液收菌后PBS洗3遍，后用PBS定容至10mL，加溶菌酶至终浓度1mg/ml。作用30min，后加PMSF，PeP，BEN.混匀，超声，超3s停4s，超了1h菌液没大变化。以上操作均在冰上。
我怀疑溶菌酶有问题，因为其消化的30min内菌液几乎没大变化，而我曾看到别人用溶菌酶消化时菌液变的挺粘稠。
今下午再做时还是没什么变化，但发现溶菌酶在冰上静置2－3h后竟然沉淀下来了，而且上清和下面的白色溶菌酶分界明显，是我的溶菌酶配的有问题吗？出现这种情况溶菌酶还能用吗？我是－20度保存的。
下一步怎么处理菌液呢？
请高手多多指教！
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秋夜蜉蝣
用户
我觉得即便是溶菌酶没有效果，但超声了这么长时间也应该可以了不知道你的超声功率是多少是不是先把破菌液离心，把上清，沉淀分别跑电泳检测一下，再下结论
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qinguo
用户溶菌酶的影响没有那么大，一般超声20分钟肯定会有效果的，可能是功率不够，建议调大功率，工作5s，停止5s，工作150次左右，最好采用冰水浴，一般超声后菌液从枪头滴下不粘连就表示有效果了
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jiahai_1983
用户非常感谢楼上的两位！我超声的功率在250W左右，刚跑上电泳，明天脱好色再告诉你们结果我又用别人的溶菌酶超了一次，一起跑电泳了。并且我发现别人的溶菌酶在冰上静放了一段时间后也出现了白色沉淀。可能溶菌酶没问题。不知道是菌种不同的缘故吗？
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qinguo
用户我功率一般在500W左右…………而且没有加溶菌酶
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