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多克隆抗体纯化实验一辛酸提取法
来自 : 蚂蚁淘
实验材料
试剂、试剂盒
仪器、耗材
实验步骤
一、材料和试剂
 
1. 正辛酸
 
2. 60mmol/L,pH4.0醋酸缓冲液,PBS
 
3. 透析袋
 
4. 高速低温离心机
 
二、操作步骤
 
1. 将待提取样品用60mmol/L,pH4.0醋酸缓冲液稀释3~4倍,调pH至4.5,对含脂质较高的标本可采用二氧化硅粉或玻璃纤维吸附法除去脂质。
 
2. 在室温下边搅拌边缓慢加入正辛酸,按每ml样品中加25μl,若样品体积小于5ml,则每ml样品内加入30μl正辛酸,搅拌30min。
 
3.10000×g离心30min,取上清液通过定性滤纸过滤,装人透析袋,用20倍体积的PBS,4℃透析过液,中间换液3~4次。
 
4. 然后每毫升混合液加0.27g硫酸铵,搅拌30min。
 
5. 以5000g离心15min,收集沉淀物,溶于少量PBS中,再以15000×g离心20min。上清液即为提取的Ig,其中大部分为IgG,约占90%,少量为IgA及IgM,回收率>80%。整个操作可在24h内完成。
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