多克隆抗体纯化实验一辛酸提取法
实验材料 | 动物血清样品 试剂、试剂盒 | 正辛酸醋酸缓冲液PBS 仪器、耗材 | 透析袋高速低温离心机 实验步骤 | 一、材料和试剂 1. 正辛酸 2. 60mmol/L,pH4.0醋酸缓冲液,PBS 3. 透析袋 4. 高速低温离心机 二、操作步骤 1. 将待提取样品用60mmol/L,pH4.0醋酸缓冲液稀释3~4倍,调pH至4.5,对含脂质较高的标本可采用二氧化硅粉或玻璃纤维吸附法除去脂质。 2. 在室温下边搅拌边缓慢加入正辛酸,按每ml样品中加25μl,若样品体积小于5ml,则每ml样品内加入30μl正辛酸,搅拌30min。 3.10000×g离心30min,取上清液通过定性滤纸过滤,装人透析袋,用20倍体积的PBS,4℃透析过液,中间换液3~4次。 4. 然后每毫升混合液加0.27g硫酸铵,搅拌30min。 5. 以5000g离心15min,收集沉淀物,溶于少量PBS中,再以15000×g离心20min。上清液即为提取的Ig,其中大部分为IgG,约占90%,少量为IgA及IgM,回收率>80%。整个操作可在24h内完成。 |
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发布于 : 2021-07-23
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