亲和层析实验方法溴化氰活化
| 实验方法原理 | DNA偶联至溴化氰活化的Sepharcse4B是通过它们本身的碱基实现的。从理论上讲，该方法也许干扰最佳结合序列的接近路径，但是这样一个简单的方法一直被广泛地成功应用。偶联效率的定量检测可经A260值测定评估，或者更精确地从偶联介质上水解核酸和进行磷酸盐测定。 | ||||||||||
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| 实验材料 | 寡核苷酸 试剂、试剂盒 | HClKCl乙醇胺-盐酸磷酸钾缓冲液储存缓冲液 仪器、耗材 | 烧结玻璃漏斗聚丙烯试管 实验步骤 | 1.混悬1.5gCNBr-Sepharose4B在水中，室温静置30min约可获得5ml溶胀的胶。经烧结玻璃漏斗过滤，当水分滤尽而溶胀的胶仍是潮湿的时候，立即停止抽滤； 2.胶在漏斗内，依次用4℃，200mlmmol/LHCl、200ml水和200ml10mmol/L，pH8.0磷酸钾缓冲液清洗； 3.将胶移入含2ml10mmol/L，pH8.0磷酸钾缓冲液的15ml试管内； 4.加50ul寡核苷酸到试管，约每ml胶需用2nmol寡核苷酸。室温下振摇16h； 5.再移入烧结玻璃漏斗，抽滤除去液体； 6.先后用200ml水和100ml1mol/L，pH8.0乙醇胺-盐酸清洗； 7.将胶移入聚丙烯试管，在7ml1mol/L，pH8.0乙醇胺-盐酸中混悬。室温下摇4～6h。该步骤灭活未偶联的活化的胶； 8.在烧结漏斗中，依次用下述溶液洗胶。100ml10mol/L，pH8.0磷酸钾缓冲液；100ml1mol/L，pH8.0磷酸钾缓冲液；100ml1mol/LKCl；100mlH2O；100ml储存缓冲液（10mmol/LpH7.6Tris-HCl，0.3mol/LNaCl，1mmol/LEDTA，0.02％NaN3； 9.4℃可储存一年。 注意事项 | 其他 | |
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发布于 ： 2021-07-26
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