从抗血清、腹水或杂交瘤上清液中纯化免疫球蛋白G组分一DEAEAffiGel Blue层析法分级分离IgG
| 实验方法原理 | |||||||||||
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| 实验材料 | 抗血清、腹水或杂交瘤上清液 试剂、试剂盒 | DEAE-Affi-GelBlue、加样缓冲液、洗脱缓冲液、晶体形式的NaN3 仪器、耗材 | 移液枪、烧杯 实验步骤 | 1）根据制造商的说明准备DEAE-Aff1-GelBlue柱子。于4℃用5倍柱床体积的加样缓冲液平衡（7mL柱床体积/mL抗血清或腹水）。 2)于4℃下透析含1g的样品40h,中间换2次加样缓冲液（每次换大约4L） 3)加样上柱，速度为10mL/h。以同样的速度用3倍柱床体积的加样缓冲液洗脱未结合的蛋白质。 4)用洗脱缓冲液以10mL/h的速度洗脱结合的1gG组分。以10mL为一组分分部收集洗脱液，并储存于4℃，直至合并各组分。 5)每组分取30〜50μl,用10%SDS-PAGE在还原条件下分析，检测含1gG的组分。 在还原条件下，IgG的重轻链将分开，相应的分子质量分别为50OOODa和25OOODa。 在这一步可测定污染的转铁蛋白的量，可用凝胶过滤层析法除去。 6)合并含有IgG的组分，在4℃下透析大于40h,期间换2次所需缓冲液（每次换4L） 7)用5倍柱床体积的加样缓冲液重新平衡DEAE-Aff1-GelBlue柱，加少许NaN3晶体阻止细菌生长，储存于4℃。 注意事项 | 其他 | |
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发布于 ： 2021-09-09
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