纯化非肌肉肌球蛋白实验一细胞匀浆
| 实验材料 | 细胞 试剂、试剂盒 | 缓冲盐溶液二异丙基氟瞬酸匀浆缓冲液 仪器、耗材 | 相差显微镜 实验步骤 | 1.准备下面的贮液和材料。 等渗的缓冲盐溶液（例如PBS，150mmol/LNaCl；10mmol/LNaPO4，pH7.2) 二异丙基氟瞬酸（DIFP） 1mol/L咪唑-HCl，pH7.0 0.5mmol/LK+EGTA，pH7.0 0.1mol/LK+ATP，pH7.0 0.1mol/LDTT NaN3 蛋白酶抑制剂 PMSF 抑胃酶肽A 亮抑酶肽 刀豆胰蛋白酶抑制剂 匀浆缓冲液： 0.34mol/L蔗糖 20mmol/L咪唑-HCl，pH7.0 5mmoI/LK+EGTA，pH7.0 5mmol/LK+ATP，pH7.0 5mmol/LDTT(干粉或用贮存液） 50μmol/LPMSF 3mmol/LNaN3 22μmol/L抑胃酶肽A 1.2μmol/L亮抑酶酞 10μmol/L刀豆胰蛋白酶抑制剂 PMSF可以用pAPMSF代替，它更稳定，但更贵。 2.洗细胞：轻轻地沉降细胞（例如3000g离心5分钟），去掉培养基，通过振摇打碎沉淀物，然后重悬于至少10倍体积冰冷的等渗缓冲盐水中。再次在新鲜的等渗缓冲盐水中沉降和重悬，总共3次。对于不同的细胞类型，离心力和时间应该进行优化。 3.最终的冰冷的细胞悬液中补加DIFP，使终浓度为5.7mmol/L（每毫升细胞悬液中加1μl）。冰浴5分钟。 4.上述的步骤2沉降细胞，然后重悬于4~6倍匀浆缓冲液中。 5.细胞匀浆要造成最大破坏，但要尽量减少氧化。 6.用相差显微镜检测细胞的裂解，证实超过99%都已经裂解了。 |
|---|
免责声明 本文仅代表作者个人观点，与本网无关。其创作性以及文中陈述文字和内容未经本站证实，对本文以及其中全部或者部分内容、文字的真实性、完整性、及时性本站不做任何保证或承诺，请读者仅作参考，并请自行核实相关内容。
版权声明 未经蚂蚁淘授权不得转载、摘编或利用其他方式使用上述作品。已经经本网授权使用作品的，应该授权范围内使用，并注明“来源：蚂蚁淘”。违反上述声明者，本网将追究其相关法律责任。
发布于 ： 2021-09-18
阅读（178）
▍
相关分类
▍
相关文章
PCR产物纯化
daikifinechemical.co.jp域名信息查询 daikifinechemical.co.jp...
从包涵体中纯化表达蛋白_园丁阿秀
MetalCentrum s.r.o. | Hutní materiály
IFNalphasignalingpathway资讯
通用计数器主要特征
蛋白质分离纯化的新技术和技术要点
shengyao923的微博_微博
肌动蛋白的提取和纯化
GUANGZHOU HANPU PHARMACEUTICAL CO.,LTD GUANGZHOU HANPU...
CN103343274A 高导热金刚石颗粒混杂增强石墨铝复合材料 ...
抗甲状腺过氧化酶抗体的临床意义
