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RNAisolation (TRIZOL method)
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RNA-isolation(TRIZOLmethod)

IsolationofRNAfromwholewormsusingTRIZOLreagent(Gibco-BRL).

1)Washwormsfroma60mmplatewith1mlDEPC-treatedwater.

2)Spindownwormsat4000xginmicrofugefor1minute.

3)Removeexcesswaterandadd1mlTrizolreagent.Vortexandinverttube.Letsitatroomtermeraturefor10minutes(shouldseestringy-likematerial).

4)Spintubesinmicrofugeat14Kfor10minutesat4°C.

5)RemovesupernatantintofreshRNAsefreeEppendorftubeandadd200µlofchloroform.

6)Vortexfor15secondsandletsitatroomtemperaturefor3minutes.

7)Spininmicrofugeat12Kfor15minutesat4°C.

8)Carefullyremovethetoplayer(clear)intoanewRNAsefreeeppendorftubeandadd500µlofIsopropanol.Inverttomix.Letsitfor10minutesatroomtemperature.

9)Spininmicrofugeat12Kfor10minutesat4°C.(RNAwillbeseenasanicewhitepellet).

10)Washpelletwith100µlof75%ethanol(madebydilutingintoDEPC-treatedwater).

11)Spininmicrofugeat7500xgfor5minutesat4°C.

12)Removesupernatantandairdrypelletfor10minutes.

13)Dissolvepelletin25µlofDEPC-treatedwater.Heatfor10minutesat60°CtohelpdissolveRNA.

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