这都是我几年来经验总结啊,觉得有用一定要顶大肠杆菌电转化感受态细胞制备第一天：1.将适合菌株（如XL1-Blue,DH5α）置于LB或其他营养丰富的培养基上，在37°C下过夜培养2.高温灭菌大的离心瓶（250-500ml）以备第二天摇瓶用3.准备几瓶灭菌水（总量约1.5升），保存于冷冻室中以备第二天重悬浮细胞用第二天：4.转移0.2-1ml过夜培养物至装有500mlLB（或其他营养丰富的培养基）的1-2升挡板∑恐?5.37°C下剧烈振荡培养2-6小时6.定时监控O.D.600值（培养1小时后每半小时测定一次）7.当O.D.600值达到0.5-1.0时，从摇床中取出摇瓶，置于冰上冷却至少15分钟（需要的话这种方式可以存放培养液数小时）8.细胞在4°C5000g下离心15分钟，弃上清液（如需要，沉淀可在4°C的10%甘油中保存一两天）9.用灭菌的冰水重悬浮细胞。先用涡旋仪或吸液管重悬浮细胞于少量体积中（几毫升），然后加水稀释至离心管的2/3体积。10.照上面步骤重复离心，小心弃去上清液11.照上面步骤用灭菌的冰水重悬浮细胞12.离心，弃上清液13.用20ml灭菌的、冰冷后的10%甘油重悬浮细胞14.照上面步骤离心，小心弃去上清液（沉淀可能会很松散）15.用10%甘油重悬浮细胞至最终体积为2-3ml16.将细胞按150μl等份装入微量离心管，于-80°C保存转化方法:1.在冰上解冻电感受态细胞添加1-10μlDNA，冰上培育约5分钟2.添加1-3μlDNA，冰上培育约5分钟3.转移DNA/细胞混合物至冷却后的2mm电穿孔容器（无泡）中4.加载P1000，准备好300μlLB或2xYT5.对电穿孔容器进行脉冲（200欧姆,25μFd,2.5千伏）（检查时间常数，应该在3以上）6.立即添加300μl的LB或2xYT至电穿孔容器中7.37°C下培养细胞40分钟至1小时以复原8.转移细胞至适当的选择培养基上培养 更多相关链接（生物谷） 试剂库>>克隆与表达>>感受态细胞 试剂库>>细胞>>感受态细胞 试剂库>>克隆与表达>>克隆试剂盒 试剂库>>克隆与表达>>转化 试剂库>>细胞培养>>培养基/琼脂混合物 试剂库>>克隆与表达>>细菌克隆载体 试剂库>>生物分子>>抗生素/抗真菌素仪器库>>实验室常用设备>>消毒/灭菌 仪器库>>实验室安全设备>>超净工作台 耗材库>>常用耗材>>手套
