提高自制酵母细菌电转化效率最重要的两点
一:生长期重要性无庸置疑,比如外源DNA基因组整合时,酵母通常选取OD600值为1-2左右.这是因为其时酵母分裂旺盛,细胞核膜较易被攻入(处于有丝分裂的前几期);同理,基因组DNA松散暴露,电转入的外源DNA较易整合;细胞生命力也较强.多种因素组合,使得转化率得以提高.二:将你的细胞洗干净些很多新手做细菌酵母电转效率不高的原因有时很简单.最后的细胞悬液中带有太多的离子,导致电流太强.曾看见新手电转时,电转杯中见火光;那已经不是实验成败,而是实验安全问题了
.建议不需要严格按书上所写步骤操作.如果自己不放心,可以多洗几遍.比如电转酵母需用水洗两遍,山梨醇洗两遍,我经常水洗三遍以彻底去除离子,效果很不错的.
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发布于 ： 2021-08-06
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