牙髓细胞的培养 1、培养用液: PBSA; 胶原酶:I型,用D-Hank’s液配制,625U/ml; 培养液:DMEM+10%FBS; 2、Protocol: u取拔除的正畸牙或阻生牙(年龄小者较佳),尽量完整的取出牙髓,置于培养皿中,用PBS冲洗; u将牙髓放入离心管,加入胶原酶2-3ml/牙, u加入等量培养液,吹打至单细胞,离心,重悬,接种,牙/6well; 牙周细胞的培养 1、培养用液: PBSA; 胶原酶:I型,用D-Hank’s液配制,625U/ml; 培养液:DMEM+10%FBS; 2、Protocol: u取拔除的正畸牙或阻生牙(年龄小者较佳),置于培养皿中,用手术刀仔细刮除附着在牙根上的牙龈组织,然后用PBS反复冲洗,以去除残余组织以及牙根表面的血细胞; u将牙放入离心管,加入胶原酶2-3ml/牙, u加入等量培养液,仔细吹打牙根表面,收集细胞,离心,重悬,接种,牙/6well; *培养获得的细胞是牙周膜细胞和成牙骨质细胞的混合体! PS: u年龄对细胞产量以及活力影响较大,最好选用年龄在10-14岁之间的正畸牙或阻生牙; u如果选用大鼠牙齿作为培养目标,培养液应稍作调整,基本原则是抑制细胞的衰老,具体做法是:适当降低血清浓度(选用进口血清最佳),如果降低血清浓度后,细胞增殖减慢,可加入促进细胞增殖的因子(例如BPE25ug/ml等)。