【求助】纯化重组蛋白多克隆抗体的方法

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【求助】纯化重组蛋白多克隆抗体的方法

2006-07-06

问题描述：

各位前辈：
我们用大肠杆菌中表达的重组蛋白，免疫兔子后获得了抗血清，虽然可以有效的识别重组蛋白，但是westernblot分析组织/细胞中的天然蛋白时背景很杂，做免疫组化效果也很差。
不知道有什么方法可以将重组蛋白的多克隆抗体纯化一下，提高其特异性？

多谢指教！

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freecell

用户

目前比较常用的是蛋白G亲和层析纯化和辛酸-硫酸铵法纯化多抗。

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dawn_grace

用户

我们这是用蛋白A亲和纯化，一般情况下效果也挺好的。但不知道你重组表达的蛋白有没有连接载体或标签，如果有，多抗中也会有抗载体的抗体，使特异性抗体的比例降低，好一些的就是用抗原亲和纯化。

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fishimmunol

用户

谢谢纤夫和dawn_grace的回复

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konan_127

用户

如果重组的抗原足够多的话，是不是可以考虑将这种蛋白包在sephrose4B柱子上，作亲和层析。

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konan_127

用户

如果重组的抗原足够多的话，是不是可以考虑将这种蛋白包在sephrose4B柱子上，作亲和层析。

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ningbo57

用户

展开引用fishimmunol各位前辈：我们用大肠杆菌中表达的重组蛋白，免疫兔子后获得了抗血清，虽然可以有效的识别重组蛋白，但是westernblot分析组织/细胞中的天然蛋白时背景很杂，做免疫组化效果也很差。不知道有什么方法可以将重组蛋白的多克隆抗体纯化一下，提高其特异性？多谢指教！......用超声破碎的E.Coli碎片吸收非特异性抗体，可去除针对大肠杆菌组分的背景。最好是免疫时用SDS-PAGE分离的目的蛋白条带，磨碎与佐剂混合后免疫动物。这样得到的抗血清背景较少。

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