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PRO-1899
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StABIlity
Purity
Aminoacidsequence
SafetyDataSheet
SDS
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ProSpec是一家全球著名细胞因子蛋白及相关抗体生产和研发品牌。ProSpec的生产和研发工厂位于以色列,专注于蛋白(重组及合成)生产研发,其独有的细菌和哺乳动物表达和蛋白折叠技术使其能在17年内成长为国际一流的科研级蛋白供应商。目前ProSpec可以提供细胞因子,生长因子,激素,信号蛋白,病毒抗原等近800种重组蛋白和100多种抗体,是世界上提供蛋白品种最多的公司之一,领先的生产工艺和规模使其可以提供毫克到克级蛋白,价格优于同类公司。绝大部分产品是天然成熟型蛋白,而不含有标签蛋白。考虑到大部分研究者希望能更灵活地配制蛋白溶液,ProSpec-Tany绝大部分产品没有添加保护剂或盐,这就对工艺提出了更高的要求。同时,ProSpec-Tany绝大部分产品为冻干粉,因此易于运输和保存。
ProSpec的生产和研发工厂位于以色列雷霍沃特(Rehovot),专注于蛋白(重组及合成)生产研发。目前ProSpec可以提供细胞因子,生长因子,激素,信号蛋白,病毒抗原等近800种重组蛋白和100多种抗体,是世界上提供蛋白品种最多的公司之一,领先的生产工艺和规模使其可以提供毫克到克级蛋白,价格优于同类公司。 欢迎各位ProSpec客户及合作伙伴拨打全国免费电话400-6800-868转801/802/803垂询蚂蚁淘科技问询相关产品及解决方案! 代理ProSpec细胞因子、生长因子、激素、病毒抗原等重组蛋白产品简介 为便于客户选购ProSpec公司的各种重组蛋白,特将选购及使用注意事项列举如下: 1、需要考虑细胞因子、生长因子的种属来源和表达细胞选择 ProSpec可以提供多种不同种属来源的细胞因子等重组蛋白,如白介素-3,可以提供人白介素-3、小鼠白介素-3、大鼠白介素-3;而瘦蛋白Leptin则有人源、小鼠源、大鼠源、绵羊源、猪源、河豚源、马源、鸡源、狗源、兔源等十多种不同Leptin。蚂蚁淘科技推荐,建议按照作用的细胞选择相同种属的细胞因子。不过不同种属之间,蛋白同源性(序列一致性)在80%以上的基本上就可确定为有交叉活性,可推荐使用。另外,蚂蚁淘还可以向您提供ProSpec不同种属细胞表达的细胞因子,以重组人血管内皮生长因子(rVEGF)为例,ProSpec可以提供大肠杆菌表达的、酵母Yeast表达的、中国仓鼠卵巢CHO细胞、人胚肾HEK细胞表达的VEGF。可以根据您的实验需求,垂询蚂蚁淘科技有限公司为您推荐不同细胞表达的细胞因子产品。 2、ProSpec细胞因子的溶解和保存建议 ProSpec绝大部分细胞因子产品是天然成熟型蛋白,而不含有载体蛋白(CarrierProtein)或其他添加剂(如BSA、HAS或蔗糖等)。同时,ProSpec-Tany绝大部分产品通常以最少量的盐来进行冻干处理,因此易于运输和保存。所以我们建议在收到产品后,务必在开盖前先离心,使粘在管盖或管壁上的蛋白聚集于管底(此时能否见到白色沉淀均属正常现象)。为获得更好生物活性和保存稳定性,请联系蚂蚁淘科技垂询相关的溶解以保存建议。 领先的生产工艺和规模使其可以提供毫克到克级蛋白,价格优于同类公司,而小包装形式的细胞因子也受广大研究生客户喜爱。作为ProSpec的中国总代理,蚂蚁淘科技有限公司为客户精选真核细胞表达、高活性的几十多种常用现货ProSpec细胞因子。更多细胞因子产品请查询蚂蚁淘网站或垂询蚂蚁淘科技有限公司。
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1.测定——分子量、PI
当目标蛋白的物理特性如分子量、PI等都不清楚时,可用PAGE电泳方法或层析方法加以测定。分离范围广阔的Superose HR预装柱很适合测定未知蛋白的分子量。用少量离子交换介质在多个含不同PH缓冲液的试管中,可简易地测出PI,并选择纯化用缓冲液的最佳PH。
2.选择——层析方法
若对目标蛋白的特性或样品成分不太了解,可尝试几种不同的纯化方法:
一 使用最通用的凝胶过滤方法,选择分离范围广阔的介质如Superose、Sephacryl HR依据分子量将样品分成不同组份。
二 用含专一配体或抗体的亲和层析介质结合目标蛋白。亦可用各种活化偶联介质偶联目标蛋白的底物、受体等自制亲和介质,再用以结合目标蛋白。一步即可得到高纯度样品。
三 体积大的样品,往往使用离子交换层析加以浓缩及粗纯化。高盐洗脱的样品,可再用疏水层析纯化。疏水层析利用高盐吸附、低盐洗脱的原理,洗脱样品又可直接上离子交换等吸附性层析。两种方法常被交替使用于纯化流程中。
3.纯化——大量粗品
处理大量原液时,为避免堵塞柱子,一般使用sepharose big beads、sepharoseXL、sepharose fast flow等大颗粒离子交换介质。扩张柱床吸附技术利用多种STREAMLINE介质,直接从含破碎细胞或组织萃取物的发酵液中俘获蛋白。将离心、超滤、初纯化结合为一。提高回收率,缩短纯化周期。
4.纯化——硫酸氨样品
硫酸氨沉淀方法常被用来初步净化样品,经处理过的样本处于高盐状态下,很适合直接上疏水层析。若作离子交换,需先用Sephadex G-25脱盐。疏水层析是较新技术,随着介质种类不断增多,渐被融入各生产工艺中。利用Hitrap HIC Test Kit 和RESOURCE HIC Test Kit可在八种疏水介质中选择最适合介质及最佳的纯化条件。低盐洗脱的样品可稍加稀释或直接上其它吸附性层析。
5.纯化——糖类分子
固化外源凝订素如刀豆球蛋白、花生、大麦等凝集素,可结合碳水化合物的糖类残基,很适合用作分离糖化细胞膜组份、细胞、甚至亚细胞细胞器,纯化糖蛋白等。两种附上外源凝集素的Sepharose 6MB亲和层析介质,专为俘获整个细胞或大复合物,如膜囊等。
6.纯化——膜蛋白
膜蛋白分离常使用去污剂以保持其活性。离子性去污剂应选用与目标蛋白相反电荷者,避免在作离子交换时和目标蛋白竞争交换介质,藉此除去去污剂。非离子性去污剂可以疏水层析除去。
7.纯化——单抗、抗原
单抗多为IgG.来源主要是腹水和融合瘤培养上清液。在培养前除去IgG.重组蛋白A介质Mabselect和rProtein A Sepharose FF对IgG有更高的载量和专一性,基团脱落更少。脱落的rProtein A用离子交换Q Sepharose HP或凝胶过滤Superdex 200,很容易去除。
疏水层析Phenyl Sepharose HP亦很适合纯化IgG.宿主抗体和污染IgG可用凝胶过滤Superdex 200在精细纯化中去除。
纯化IgG抗原最有效的方法是用活化偶联介质如CNBr、NHs activated Sepharose FF偶联IgG,再进一步获取IgG抗原。
HiTrap IgM是用来纯化融合瘤细胞培养的单抗IgM,结合量达5mg IgM.HiTrap IgY是专门用来纯化IgY,结合量达100mg纯IgY.
8.纯化——重组蛋白
重组蛋白在设计、构建时应已融入纯化构想。样品多夹杂了破碎细胞或溶解产物,扩张柱床吸附技术STREAMLINE便很适合做粗分离。Amersham biosciences提供三个快速表达、一步纯化的融合系统。
一 GST融合载体使要表达的蛋白和谷胱甘肽S转移酶一起表达,然后利用Glutathione Sepharose 4B作亲和层析纯化,再利用凝血酶或因子Xa切开。
2. 蛋白A融合载体使要表达的蛋白和蛋白A的IgG结合部位融合在一起表达,以IgG Sepharose 6 FF纯化。
二 含组氨酸标记(Histidine-tagged)的融合蛋白可用Chelating Sepharose FF螯合Ni2+金属,在一般或变性条件(8M尿素)下透过组氨酸螯合融合蛋白。HisTrap试剂盒提供整套His-Tag蛋白的纯化方法。
9.纯化——包涵体蛋白
包涵体蛋白往往需溶于6M盐酸胍或8M尿素中。一般包涵体蛋白样品的纯度越高,复性效果越好。SOURCE 30 RPC反相层析介质很适合纯化复性前的粗品,并可以1MnaOH重生。此方法纯化后的包涵体蛋白,复性回收率明显提高。
10.包涵体蛋白固相复性
许多文献报导将包涵体蛋白在变性条件下固定(吸附)在层析介质上,一般用各种Sepharose FF离子交换层析介质。而且无需大量稀释样品,并将复性和初纯化合二为一,大大节省时间及提高回收率。
固相复性方法也被用于以HiTrap Chelating金属螯合层析直接复性及纯化包涵体形式表达的组氨酸融合蛋白;以HiTrap Heparin肝素亲和层析直接复性及纯化包涵体形式表达的含多个赖氨酸的融合蛋白。两种亲和层析预装柱均可反复多次重复使用,比一般试剂盒更方便、耐用。
11.纯化——中草药有效成分
中药的化学成分极其复杂。例:如用甲醇分离黄酮甙,三糖甙先被洗下来,二糖甙其次,单糖甙随后,最后是甙元。Sephadex LH-20可使用水、醇、丙酮、氯仿等各种试剂,广泛用于各种天然产物的分离,包括生物碱、甙、黄酮、醌类、内脂、萜类、甾类等。
生物碱在酸性缓冲液中带正电,成为盐,HiTrap SP阳离子交换层析柱可以分离许多结构非常近似的生物碱。相反,黄酮、蒽醌、皂甙、有机酸等可溶于偏碱的缓冲液中,在HiTrap Q阴离子交换柱上分离效果良好。
一般多糖纯化大多使用分子筛如Sephadex,Sephacryl.若分子量在600KD以下,并需更高分辨率,可选择新一代的Superdex.一般植物可能含水溶性、酸溶性、碱溶性多种多糖。SOURCE5、15、30RPC反相层析也很适合各种中药有效成分的检测、分离和放大制备。由于中药的成分非常复杂,SOURCE反相层析可用范围为PH1-14 ,并可用1M NaOH,1M HCL清洗、再生。比传统硅胶反相层析更易于工艺优化及在位清洗,寿命也更长。
12.纯化——肽类
肽类的来源有天然萃取,合成肽和重组肽三种。肽容易被酶降解,但可从有机溶剂或促溶剂中复性,所以多以高选择性的反相层析如SOURCE 30RPC、SOURCE 15RPC、SOURCE 5RPC或离子交换Minibeads、Monobeads作纯化。Superdex Peptide HR是专为肽分子纯化设计的凝胶过滤预装柱,能配合反相层析做出更精美的肽图。肽分子制备可用离子交换配合凝胶过滤Superdex 30 PG。医学都市多功能
13.纯化——核酸、病毒
核酸的纯化用于去除影响测序或PCR污染物等研究。核酸可大致上分为质粒DNA、噬菌体DNA和PCR产物等。病毒也可视作核酸大分子,和质粒DNA一样,可用分离大分子的Sephacry S-1000 SF、Superose或Sepharoce 4FF凝胶过滤介质去除杂蛋白,再配合离子交换如Mono Q、 SOURCE Q分离核酸。
14.纯化——寡核苷酸寡酸苷酸
多应用在反义(anti-sense)DNA、RNA测序、PCR和cDNA合成等研究。合成后含三苯甲基的寡核苷酸以阴离子交换的Mono Q或快速低反压的SOURCE Q在PH12下可除副产物,并避免凝集和保护基的脱落。载量大大高过反相层析,可用做大量制备。不含三苯甲基的失败序列可用反相柱ProRPC去除。
15.脱盐、小分子去除
使用凝胶过滤介质Sephadex G10,G15,G25,G50等去除小分子,效率高,处理量可达床体积30%.只需在进样后收集首1/3-1/2柱体积的洗脱液,HiPrep Desalting(26ml)可在数分钟为多至10ml样品脱盐。
16.疫苗纯化
使用凝胶过滤介质Sepharose 4FF纯化疫苗,去除培养基中的杂蛋白,处理量可大于床体积10%.柱高一般40-70cm,整个过程约半至一小时。使用此法生产的疫苗品种有乙肝、狂犬、出血热、流感、肺结核、小儿麻痹疫苗等。分子量较小的疫苗可使用Sephacryl S-500HR,如甲肝疫苗等。
17.抗生素聚合物分析
中国药典从2000年版起要求抗生素头孢曲松钠需要找出聚合物占产品的白分比,规定使用Sephadex G10凝胶过滤法测定。
18.纯化-基因治疗用病毒载体
SORRCE 15Q
19.纯化-基因治疗用质粒
Q Sepharose XL,SOURCE 15Q,STREAMLINE Q,Sephacryl S500,Plasmidselect 在下游纯化中,可应用不同层析技术在纯化生物分子的同时,去除各种污染物。 1.去除——内毒素
内毒素又称热原。含脂肪A、糖类和蛋白,是带负电的复合大分子。
内毒素的脂肪A部份有很强的疏水性。但在高盐下会凝集,无法上疏水层析。利用疏水层析试验盒(17-1349-01)可选择结合目标蛋白的介质而去除内毒素。
内毒素与阴离子交换介质Q或DEAE Sepharose Fast Flow有较强结合。可在洗脱目标蛋白后用高盐缓冲液或NaOH去除。
利用CNBr或NHS Sepharose FF可偶联内毒素底物如LAL,PMB,自动成亲合层析介质结合内毒素。内毒素经常是多聚体,凝胶过滤层析可有效地将之去除。
2.去除——蛋白中的核酸
大量核酸增加样本黏度,令区带扩张,反压增加,降低分辨率和流速。药审和食检对核酸含量也有严格限制。
胞内表达蛋白的核酸问题尤其严重。核酸带阴电荷,在初步纯化时利用阳离子交换介质如STREAMLINESP,SP Sepharose Big Beads,SP或CM Sepharose FF,SP SepharoseXL结合目标蛋白,可除去大量核酸。
核酸在高盐下会和蛋白解离,疏水层析介质很适合用来结合目标蛋白,在纯化蛋白的同时去除核酸。
利用核酸酶将核酸切成小片断,用凝胶过滤做精细纯化时便很容易去除了。
3.去除——病毒和微生物
病毒和微生物可成为病原,应尽量减除。结合不同层析技术,使用注射用水,用NaOH定期进行仪器和凝胶的在位消毒和在位清洗,皆可避免污染物增加。
病毒大都有脂外壳。可用与目标蛋白电荷相反的S/D(solvent/detergent)处理,使病毒失活,如Triton和Tween.再用适当的离子交换介质如CM Sepharose FF结合目标蛋白,去除S/D.
其它污染物可以改变pH和离子强度使其从目标分子中解离或失活,凝胶过滤介质Superdex及多种吸附性介质,SOURCE都是很好的精细纯化介质,可去除多种微量污染物。 凝胶是指颗粒大小在1埃到10埃之间的混合物。高分子溶液和某些溶胶,在适当的条件下,整个体系会转变成一种弹性的半固体状态的稠厚物质,失去流动性。这种现象称为胶凝作用,所形成的产物叫做凝胶或冻胶.
“气凝胶”是指分散系为气态的,如:云,雾等,“固凝胶”有烟水晶等,“液凝胶”就是呈液态的胶体,如氢氧化铁胶体 。向左转|向右转
我想在体外培养的细胞中,加入PD-L1重组蛋白,激活PD-L1:PD-1通路,但我没能查到相关的文献,不清楚PD-L1重组蛋白的用量。请问各位有相关的经验吗?或者阅读过相关的文献?
最近留意了几个消息,发现生产线一家比一家大,结合最近国家在搞药品上市许可持有人制度试点,五年以后这行业竞争会有多激烈,产能会不会过剩的。
百迈博生产线6000升(3000*2)
东耀生产线10000升(2000*5)
三生制药生产线30000升(5000*6)
信达生物生产线>15000升
百泰生物生产线4000升
药明康德生产线2000升(不知现在规模有没有扩大)
还有很多低调的公司可能规模更大……
将来在国内,按照现有的产量结合所有生产线的总和生产出来的重组蛋白会不会以白菜价进入市场的,
生物制品细胞制备过程中不得使用青霉素或β-内酰胺(β-Lactam)类抗生素,明确表明不准使用青霉素。那么进行的重组蛋白类表达的微生物发酵,可以用青霉素吗?
2、2015版药典三部,各论中指出,”将检定合格的工作种子批菌种接种于适宜培养基(可含适量抗生素)中培养“,”发酵用培养基(采用适宜的不含抗生素的培养基)“。
这里说明种子培养基中可以使用抗生素,而且也没有限定究竟是哪种抗生素。
3、关于发酵中使用的抗生素,不知大家一般用哪家的,一些常用的,氨苄西林钠,硫酸卡那霉素,氯霉素等,都是用的什么级别,那个厂家的呢?我现在生工的,阿拉丁的,生兴生物的都用过。主要还是用的生工生物的,但是生工生物的抗生素都是进口分装的,不仅仅抗生素,国内很多进口分装的试剂,都无法提供相应的产品质量检测证书。而且因为是分装的,基本也就属于只有销售,所以,以后真的生产了,原材料来源的稳定性也无法保证。请问这个问题,大家是怎么解决的,一般用的哪家的呢。
2.准备旋转培养瓶,用于按比例扩增Sf9细胞,将合适大小的两孔盖连接在转瓶的一个 侧臂,另用一平盖接在另一侧臂。将一段短管(约6英寸或15 cm)装在通气孔中,末端连接一滤器,借助张力器用管索将管子与通气孔和滤器固牢。
3.将一段长管(30~60 cm)连接至进气孔,并在末端连接一滤器,用管索加固,另一段管子连接于滤器的另一端,用管索固牢。管子末端用铝箔封好。
4.将与两孔装置相对的侧壁上的盖子旋转90度以松开,高压灭菌培养瓶1 h。
5.将适应了无血清培养液的细胞接种于经高压灭菌的培养瓶中。将培养瓶装至半
2、目前市场上重点的蛋白质概股有:荣之联、科华生物、江中药业、浙江医药等。
3、目前生产蛋白类药物的上市公司有28家:
①东宝生物主生产:胶原蛋白应用剂型的开发如胶原蛋白创可贴、胶原蛋白喷雾剂等。
②利德曼主要生产:生化诊断试剂种类有肝功类、肾功类、血脂与脂蛋白类、血糖类、心肌酶类等,具体产品包括“肌酸激酶MB同工酶测定试剂盒”、“腺苷脱氨酶测定试剂盒”和“低密度脂蛋白胆固醇测定试剂盒”等,能够满足医疗机构、体检中心等各种生化检测需求。另一类产品生物化学原料,主要品种包括诊断酶、抗原、抗体、缓冲剂、酶底物、培养基等,生物化学原料是生产体外诊断试剂的主要原料,并可以应用于制药、化工和食品加工等领域。
③安科生物主要生产:肿瘤蛋白P185及瘦素生物检测试剂。
④沃森生物主要生产:人血白蛋白、人免疫球蛋白(肌注)、人乙肝免疫球蛋白等。
⑤博雅生物公司主要产品:涵盖白蛋白、免疫球蛋白和凝血因子三大类。⑦华兰生物工程重庆有限公司主要生产:人血白蛋白和静注人免疫球蛋白的生产文号,破伤风免疫球蛋白、静脉注射用人纤维蛋白原。
⑥上海莱士主要生产:人血白蛋白、静注射人免疫球蛋白、人凝血酶原复合物、人凝血因子VIII、冻干人凝血酶、冻干人纤维蛋白原、外用冻干人纤维蛋白粘合剂等。
⑦深圳市海普瑞药业有限公司主要生产用于治疗纤维化、炎症、肾病、肿瘤、血液和免疫系统性疾病的原创药物。
⑧海正药业公司主要生产:大分子药物已有抗体药物、人重组白蛋白、人重组胰岛素、融合蛋白、基因工程疫苗等类型的产品。
⑨其它生产厂家的信息有:天坛生物,华兰生物,华神集团,人福医药,益佰制药,江中药业,恒瑞医药,南京瑞尔医药有限公司,千红制药,,紫光古汉,岳阳兴长,金城医药,华北制药,三峡新材,华海医药,ST生化,舒泰神,四环生物,交大昂立,常山药业等医药公司。展开
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